skanuj0002

analityczny. Na podstawie pomiarów sporządza się wykres zależności mierzonej wkHkośd fizycznej od stężenia substancji, co umożliwia określenie stężenia substancji w badanej próbce.

Cel ćwiczenia: spektrofotometryczne oznaczanie stężenia białka

Dzięki obecności aminokwasów aromatycznych [tyrozyna, tryptofan] białka absorbują

światło ultrafioletowe przy X-280 nm. Znając molowy współczynnik absorpcji dła

danego białka lub sporządzając krzywą kaBbracyjną możliwe jest wyznaczenie

stężenia białka w roztworze.

Wykonanie:

1.    Sporządzić serię wzorcowych roztworów białka [albuminy surowicy wołowejJ o stężeniach od 0,1 mg/ml do 1 mg/ml oraz próbkę odczynnikową.

2.    Zmierzyć absorbanęję wszystkich próbek względem próby odczynnikowej przy X=280 nm.

3.    Wykonać pomiar absorbancJi próbki o nieznanym stężeniu białka.

Opracowanie wyników i dyskusja:

1.    Wyniki pomiarów zestawić w tabeli oraz przedstawić w formie wykresu A-f(c), pr2ez punkty próbek wzorcowych przeprowadzić prostą.

2.    2 parametrów otrzymanej prostej regresji oraz wartości absorbancJi badanej próbki obliczyć stężenie Walka w próbce.

3.    Znając rzeczywiste stężenie białka w próbce badanej (informacja zostanie podana przez asystenta po zakończeniu ćwiczenia) obliczyć błąd względny wykonanego oznaczenia oraz przedyskutować dokładność i precyzję stosowanej metody.