stawić w temperaturze pokojowej. W celu lepszego dostępu tlenu, próby od 1—4 co pewien czas wstrząsnąć. Po 20 min zanotować wyniki reakcji.
Tabela II. Wykrywanie aktywności oksydazy polifenolowej
Próba |
Wyciąg |
Woda |
Bufor pH 7,4 |
KCN |
Pirokat |
nr |
ml |
ml |
Ml |
ml | |
i |
i |
0 |
1 |
0 |
0,1 |
2 |
i |
0,1 |
1 |
0 |
0 |
3 |
i |
0 |
1 |
2 krople |
0,1 |
4 |
i |
0 |
1 |
0 |
0,1 |
CUA-f J U>3 |
i |
0 |
1 |
0 |
0,1 |
Obecność oksydazy cytochromowej w ekstrakcie tkankowym można wykazać w reakcji, w której wykorzystywany jest odczynnik NADI. W skład odczynnika wchodzą: a-naftol i p-fenylenodwuamina zmieszane w stosunku 1:1. W wyniku nieenzymatycznej redakcji zawartego w mitochondriach cytochromu c przez p-fenylenodwuaminę powstaje p-fenylenodwuimina, która w obecności a-naftoiu przechodzi w barwny, niebieski kompleks.
Do 4 probówek odmierzyć podane w tabeli III objętości poszczególnych roztworów; do probówki nr 4 dodać zagotowany nadsącz. Próby starannie wymieszać i pozostawić na 30 min w temperaturze pokojowej. Obserwować powstanie niebieskiej barwy. Wyniki zapisać w tabeli.
Tabela III. Wykrywanie oksydazy cytochromowej
9