img043 (56)

Identyfikacja drobnoustrojów za pomocą technik elektroforetycznych

Analiza profili białkowych - skład ilościowy i jakościowy wszystkich białek komórkowych

Sposób postępowania:

>    izolacja białek komórkowych

>    rozdział elektroforetyczny w żelu poliakrylamidowym

>    barwienie rozdzielonych białek

>    porównanie z profilami białkowymi bazy danych

Metoda pozwalająca określić przynależność gatunkową mikroorganizmu

Elektroforeza

dwukierunkowa

Doskonalenie szczepów mikroorganizmów

Procesy biotechnologiczne z zastosowaniem mikroorganizmów wyizolowanych bezpośrednio ze środowiska naturalnego na ogół przebiegają z wydajnością niewystarczającą, aby ich użycie na skalę przemysłową było opłacalne ekonomicznie

Dobierając warunki hodowli można zmieniać aktywność metaboliczną szczepów i uzyskiwać podwyższenie wydajności pożądanego produktu, w granicach określonych genotypem.

Najczęściej jednak otrzymuje się je poprzez poddawanie specjalnym zabiegom doskonalącym ich cechy technologiczne.

Doskonalenie cech produkcyjnych mikroorganizmów

Doskonalenie szczepów mikroorganizmów

Modyfikację genotypu szczepu macierzystego, wyizolowanego z próbki środowiskowej i scharakteryzowanego taksonomicznie, można prowadzić na drodze:

-    mutagenizacji

-    manipulacji genetycznych

Mutaaeneza - proces prowadzący do powstania mutanta Mutac ja - trwała zmiana w sekwencji DNA, która jest przekazywana komórkom potomnym Mutant - mikroorganizm różniący się genotypem od komórek szczepu macierzystego; zmiany genotypowe w komórkach mutanta muszą być trwałe, dziedziczone przez komórki potomne, ich obecność musi nadawać szczepowi mutanta właściwości fenotypowe różniące go od szczepu macierzystego

W programie mutacyjno-selekcyjnym należy broć pod uwagę genotypową i fenotypową zmienność biologiczną

1)    wstępne testy oceny aktywności szczepów

2)    dokładna charakterystyka przy zastosowaniu zróżnicowanych warunków hodowli

3)    opracowywanie optymalnych warunków procesowych

Technika mutagenizocji opiera się na metodzie prób i bi

Najczęściej nieznana jest zależność pomiędzy rodzajem mutacji na poziomie molekularnym a typem powstających mutantów, więc klasyczna mutagenizacja to typowe postępowanie losowe.

Stosuje się więc mutagenizację wielokrotną różne mutageny, które mogą wywoływać różne skutki oraz poszukuje się mutantów korzystnych wśród bardzo dużej liczby izolatów.

Doskonalenie szczepów mikroorganizmów

Nie jest możliwe w pełni racjonalne postępowanie mutagenizacyjno-selekcyjne (nie da się ustalić jednoznacznej korelacji pomiędzy miejscem i rodzajem wywołanej mutacji DNA a typem otrzymanego mutanta i ostatecznym efektem fizjologicznym tej mutacji).

Można w pewnym stopniu postępowanie zracjonalizować przez:

1)    dobór odpowiednich mutagenów

2)    ustalenie wielkości dawek mutagenów

3)    umiejscowienie czasu ich działania w określonej fazie replikacji DNA

4)    dopracowanie kryteriów najbardziej efektywnej selekcji pożądanych mutantów

Mutageneza

Mutaaeneza spontaniczna (samorzutna) - proces powstawania mutacji zachodzący niezależnie od określonych czynników zewnętrznych

•    błędy popełniane w czasie replikacji DNA

•    błędy powstające w wyniku samorzutnych modyfikacji chemicznych zasad DNA

Częstość mutagenezy spontanicznej <4 bakteriofag T4 - 10'⁷ H Escherichia coli - 10 ⁹ S brosophila melanogaster - 10^-10