308 (25)

Doświadczalnie ustalono, że DNA izolowany z różnych komórek wykazuje różną gęstość. która zależy od procentowego względnego stężenia zasad G oraz C. Oznaczając tę ostatnią wielkość przez O_l<t._Cr gęstość DNA (p^) można wyznaczyć z empirycznej zależności:

1660 + 98. (12.9)

Stosując tę metodę, można rozdzielić natywny DNA od /.denaturowanego (różnica gęstości 20 kg/m').

Dla rozdziału składników mieszaniny różniących się stałą sedymentacji stosuje się tak zwany gradient izokinetyrzny. Formuje się go w probówce wirnwnic/cj z roztwx>rów sacharozy, krzemionki lub żelu. Zwykle stosuje się liniowy gradient gęstości sacharozy o stężeniu 5-20% lub 15-30%. Wirowanie w gradiencie izoki-nctycznym umożliw ia określenie współczynnika sedymentacji i cifZaru cząsteczkowego. Jeżeli zawiesina posiada składnik o znanej wartości s, (standard wewnętrzny). to po wirowaniu, oznaczając położenie składników mieszaniny odpowiednio przez r, i r>. otrzymujemy:

lub na przykład dla RNA

IL.
^ri
	.to)
^s2t *•>	W

(12.10)

(12.11)

pk* t_ummr - tttpftk/yaniki **ó\n*i**cr narm*li/i>«anr wt$tyetn lemęcrmwy JOT i »ody

Ten sposób umożliwia oznaczenie współczynnika sedymentacji lub średniej masy cząsteczkowej dla określonego rodzaju biopolimeru w formie zależności względnej s,/j₂. Korzystając z równania (12 8). otrzymuje s»ę bezwzględną wartość M. Oprócz wartości współczynnika sedymentacji konieczna jest znajomość współczynnika dyfuzji D. który można wyznaczyć z pierwszego prawa Ficka lub z pomiaru wielkości rozmycia granicy w szczególnych warunkach wirowania 12.2J. Klcktroforeza

Elektroforeza należy do zjawisk elektrokinetycznych i polega na wędrówce cząstki fazy rozproszonej obdarzonej ładunkiem w polu elektrycznym. Szybkość przemieszczania się cząstki zależy przede wszystkim od stosunku ładunek/masa. ale zależy też od konformacji polimeru przy stałym natężeniu pola. Wielkością referencyjną występującego zjawiska jest ruchliwoić elektroforrtyczna. która określa prędkość przemieszczania się cząstek na jednostkę natężenia pola:

(12.12)

308