8

Enzymy 115

cmdardowej jednostki „U” (ang. U = unit)-, w języku polskim określanej jako „J”. Jest

■    mka ilość enzymu, która katalizuje przemianę 1 pmola substratu lub określonej jego ;s:i, tj. 1 pmola odpowiednich grup chemicznych (np. w białkach lub polisacharydach),

*    ::ągu 1 minuty, w temp. 30°C i w optymalnych warunkach (zwłaszcza pH i stężenia -'mratu zapewniającego wysycenie enzymu). Mianem jednostki standardowej jest ' .min.

Poza jednostką standardową (J) do wyrażania aktywności enzymu stosuje się również fair.ostkę o nazwie katal (kat). Jest to taka ilość enzymu, która katalizuje przemianę 1 - substratu w ciągu 1 sekundy. Mianem katała jest mol/s. Jest to jednostka 60 milionów większa od jednostki standardowej, stąd też zaleca się stosowanie jednostek p -rewnych:

mikrokatal (pkat = 10~⁶ kat), nanokatal (nkat = 1CT⁹ kat), rikokatal (pkat= 10“¹² kat).

-    sżność liczbowa pomiędzy jednostką standardową i katalem przedstawia się

■    - tępująco:

1 kat = 1 mol/s = 60 moli/min = 60 x 10⁶ p.mola/min = 6 x 10⁷ J

1 J = 1 (imol/min = 1/60 jimola/s = 1/60 pkat = 16,67 x 10^-9 kat = 16,67 nkat

*    metodach oznaczania aktywności różnych enzymów często stosuje się jednostki umowne definiowane np. jako przyrost absorbancji o ustaloną wartość, mierzonej przy Kreślonej długości fali w warunkach danej metody (jednostki umowne są stosowane np. w

: dzie Anfinsena oznaczania aktywności RNAzy lub w metodzie Bcrnfelda oznaczania

-    wności a-amylazy (patrz rozdziały 4.9.2 i 4.8.1).

Inną wielkością określającą zdolność enzymu do katalizowania reakcji chemicznych stała katalityczna k_kat, określająca stosunek szybkości maksymalnej reakcji V_max do

-    - sowitego stężenia enzymu:

k_kat= V_max/[E] = pM/s/pM = 1/s

Stała katalityczna (liczba obrotów) określa liczbę cząsteczek substratu -‘tworzonych przez cząsteczkę enzymu w czasie 1 sekundy, w warunkach, w których = ym wykazuje maksymalną aktywność.

Ważną wartością liczbową charakteryzującą czysty enzym, a także preparaty ;'Tnatycznc uzyskiwane w trakcie izolacji enzymów, jest aktywność właściwa będąca rą jednostek standardowych (lub jednostek umownych) przypadających na 1 mg białka

-    mg białka). Oczyszczanie enzymów, polegające na sukcesywnym stosowaniu norodnych technik frakcjonujących, najczęściej chromatograficznych, ma za zadanie

? ‘ r-manie enzymu w stopniu możliwie jak najczystszym przez usunięcie z wyjściowego ".maratu innych zanieczyszczeń białkowych. Stosując prawidłowy tok postępowania,

*    czasie oczyszczania enzymu uzyskuje się stały wzrost aktywności właściwej. Stopień *• zyszczenia każdego preparatu uzyskanego w czasie izolacji enzymu określa się podając

jnek aktywności właściwej w aktualnym roztworze enzymu do aktywności właściwej

*    ~aterialc wyjściowym.