DSCF6749

106

4.    Dozowanie roztworów - zaworem o stałej objętości dozowania.

Nabrać około 2 ml roztworu do strzykawki (wypchnąć pęcherzyk powietrza) i igłę strzykawki umieścić we wlocie iniektora. Wstrzyknąć próbkę do pętli iniektora aż do uzyskania przelewu. Przesunąć dźwignię zaworu (wstrzyknięcie próbki). Postępować dalej według załączonej instrukcji. Po uzyskaniu piku, wprowadzić na kolumnę kolejną próbkę.

5.    Wykreślenie prostej wzorcowej.

Na podstawie    uzyskanego chromatogramu wyliczyć

następujące parametry: czasy retencji (tr) współczynniki retencji, wysokości (h) i pola powierzchni (P) pików. Założyć, że otrzymany pik jest trójkątem równoramiennym. Wykonać wykresy zależności:

-    pola powierzchni piku od stężenia substancji chromatografowanej,

-    wysokości piku od stężenia substancji chromatografowanej.

6. Przygotowanie roztworu badanego; preparat farmaceutyczny PROPYLOTHIOURACYL 50 mg, średnia masa tabletki wynosi 0.200 g. Aby ilość analizowanej próbki znalazła się w zakresie wyznaczonym przez krzywą wzorcową należy odważyć około 0.0501 g sproszkowanych tabletek, co odpowiada zawartości w próbce 12.5 mg substancji czynnej.

6.1.    Odważoną próbkę przenieść do kolbki miarowej pojemności 10 ml i rozpuścić w 5 ml wodorotlenku sodu o stężeniu c(NaOH) = = 0.1 mol/l, mieszaninę wytrząsać przez około 10 minut. Następnie uzupełnić wodą do kreski. Roztwór przesączyć i analizować przesącz.

6.2.    Zarejestrować chromatogram próbki leku, zachowując te same warunki chromatografowania. Po uzyskaniu chromatogramu policzyć: czas retencji (tr), współczynnik retencji, wysokość piku (h) oraz jego pole powierzchni zakładając, że otrzymany pik jest trójkątem równoramiennym.

6.3.    Po zakończeniu pracy kolumnę należy kondycjonowaó 20% i 95% metanolem.

7. Opracowanie wyników.

-Porównać czasy retencji pików otrzymanych w wyniku chromatografowania analizowanych substancji z czasami retencji pików wzorców.

-    Obliczyć zawartość substancji czynnej w preparacie farmaceutycznym metodą prostej wzorcowej. Wyniki zinterpretować.

-    Zinterpretować otrzymane chromatogramy.

37. WYZNACZENIE PARAMETRÓW ROZDZIAŁU CHROMATOGRAFICZNEGO

Ćwiczenie ma na celu wyznaczenie podstawowych pgametrdw opisujących rozdział chromatograficzny mieszanin, w skład Dórych wchodzą nitrobenzen, benzen i ksylen oraz ksylen i benzen. 2wiązki te wchodzą w skład mieszanin stosowanych do sprawdzenia poprawności rozdziału chromatograficznego kolumn w metodzie ituomatografii kolumnowej z odwróconymi fazami.

Odczynniki

Metanol do HPLC, wodny roztwór o stężeniu 95%.

Faza ruchoma: metanol: woda (17 : 3).

Chloroform do HPLC.

Benzen do HPLC.

Nitrobenzen do HPLC.

Ksylen do HPLC.

Argon.

Aparatura i sprzęt laboratoryjny

Zlewka pojemności 300 ml	1 szt.
Koby miarowe pojemności 10 ml	5 szt.
Zlewki pojemności 30 ml	5 szt.
Pipeta pojemności 10 ml	1 szt.
Strzykawka lekarska	1 szt.
Cylinder miarowy pojemności 250 ml	1 szt.
Chromatograf cieczowy
Waga analityczna

Wykonanie ćwiczenia

Kondycjonowanie kolumny chromatograficznej

1.1. Około 50 ml 95% roztworu metanolu odgazować przepuszczając argon przez 15 minut.

Uwaga:    odgazowywanie ma na celu usunięcie

pęcherzyków gazu, zakłócających detekcję wykrywanych składników oraz mogących uszkodzić kolumnę. Odgazowany roztwór metanolu przepuszczać przez kolumnę z szybkością 1 ml/min przez około 30 minut

1.2.200 ml fazy ruchomej (metanol: woda w stosunku objętościowym 170 : 30) odgazować przepuszczając przez około 15 minut argon. Odtlenioną fazą ruchomą kontynuować kondycjnowanie