3582325875

HPLC to wysokosprawna (wysokociśnieniowa) chromatografia cieczowa, w której

faza ruchoma jest tłoczona do kolumny pod zwiększonym ciśnieniem.

Elementy:

•    Zbiornik fazy ruchomej

•    Filtr

•    Pompa

•    Manometr

•    Dozownik (umożliwia wprowadzenie próbki pod ciśnieniem atmosferycznym do kolumny, w której panuje wysokie ciśnienie (kilkadziesiąt MPa})

•    Kolumna z termostatem (zwykle stalowe, pakuje się je sorbentami „na mokro" (techniką zawiesinową) lub kupuje się gotowe; mikrokolumny o bardzo małej średnicy - pojawiają się trudności z jednolitym upakowaniem; przedkolumna - dodatkowa krótka kolumienka do zatrzymywania zanieczyszczeń)

•    Detektor: wzmacniacz i kolektor frakcji (konieczny element, reaguje na składniki rozdzielone, może nim być polarymetr)

Rodzaje detektorów:

z Spektrofotometryczne (mierzą absorbancję w UV i Vis)

•    UV 254nm (bo większość ją absorbuje)

•    W zakresie 190-600nm z płynnym nastawieniem długości fali

•    Z matrycą diod (DAD): część promieniowania niezaabsorbowana przez próbkę jest rozszczepiana i pada na matrycę diod, z których każda rejestruje wąskie spektrum światła; widmo można otrzymać w 3D

Z Spektrofluometryczne: czujne na związki wykazujące fluorescencję z Refraktometryczne: pomiar różnicy współczynników załamania czystej fazy ruchomej i fazy ruchomej z substancjami rodzielonymi s Elektrochemiczne: wykrywają substancje ulegające reakcjom utleniania i redukcji

Faza ruchoma w HPLC powinna:

o Odpowiednio rozpuszczać próbę o Umożliwiać detekcję próbki o Być bardzo czysta

o Nie reagować z fazą stacjonarną, ani z próbką o Nie rozkładać się w trakcie analizy o Być tania