20326

Polimerazowa reakcja łańcuchowa (PCR) - najbardziej powszechna metoda namnażania DNA.

Podgrzewamy, denaturujemy, rozpada się nic, wprowadzamy 3 składowe: startery (jednoniciowe, krótki sekwencje, do obu końców fragmentów), polimeraza, nukleotydy.

Kryminalistyka, diagnostyka prenatalna, identyfikowanie mutacji, klasyfikowanie i płeć zarodków.

5.    Identyfikowanie genu sondę radioaktywną (Southern blotting)

Otrzymywanie sondy cDNA (odwrotna transkryptaza, usunięcie mRNA)

DNA genomu -> fragmentacja, elektroforeza (krótkie wędrują szybko), denaturacja -> odbitka na filtrze + sonda -> komplementarne nici łączą się z sondą -> przykrywamy kliszą radioaktywną

Płeć zarodka, identyfikowanie genu

6.    Hybrydyzacja in situ - fluoryzacja, identyfikowanie

Rodzaje aberracji chromosomowych Mutacje - nagłe skokowe zmiany:

1. Aberracje chromosomowe (struktura chr)

a.    Delecja- ubytki dużych partii chromosomów, pęknięcie chromosów

i.    Fragment dicentryczny - ginie bo bez centromeru (dupilkacja i delecja)

ii.    Niesymetryczny crossing-over (dupilkacja i delecja)

iii.    Często letalne

b.    Duplikacja

c.    Inwersja - chromosom pęknie w 2 miejscach i odwróci się o 180 st i wbuduje się z powrotem

i.    Paracentryczne - nie obejmuje centromeru

ii.    Pericentryczne - centromer na obszarze inwersji

iii.    Efekt Sturtevanta - inwersja na obuchromosomach homologicznych, różny układ alleli na chromosomie powoduje różne nasilenie mutacji, dwa leżące obok siebie geny sa regulowane przez ten sam promotor, wpływa na zmianę ekspresji genów, może aktywować onkogeny

iv.    Jeden chr jest normany, drugi z inwersja - czasem koniugują, czasem próbują się dopasować (pętle) = tworzą się gamety niefunkcjonalne i funkcjonalne

Supergen- absolutne sprzężenie, nigdy nie ulegnie rozprzężeniu, służą do mapowania genów

d.    Translokacja - wymiana fragmentów miedzy chr niehomologicznymi

i. Homologiczna - zamiana całych fragmentów połączonych nici = Efekt Sturtevanta