25680

METODA CHROMATOGRAFII KOLUMNOWEJ - metoda ta polega na pomiarze przy długości fali świetlnej 450 nmabsorbancji eterowych roztworów beta-karotenu i pozostałych karotenoidów wyizolowanych za pomocą adsorpcyjnej chromatografii kolumnowej

Wykonanie oznaczenia beta-karotenu

Postępowanie analityczne obejmuje etapy:

•    Ewentualne zmydlanie próbki i ekstrakcje oznaczanych karotenoidów

•    Rozdział na kolumnie chromatograficznej

•    Pomiar zawartości beta-karotenu

1. Ekstrakcja karotenoidów

•    Odważyć 5-10 g zhomogenizowanej próbki zawierającej 10-500 mikrogramów karotenoidów

•    Wykonać ekstrakcję karotenoidów po uprzednim zmydlaniu próby eterem naftowym (zmydlanie próbki zalecane jest przede wszystkim do produktów pochodzenia zwierzęcego oraz mieszanych i zawierających tłuszcz)

•    Lub po roztarciu próby z bezwodnym siarczanem sodu, do uzyskania jednorodnej suchej masy

•    Uzyskany ekstrakt eterowy odparować do sucha w atmosferze azotu na łaźni wodnej lub w wyparce próżniowej rotacyjnej

•    Suchą pozostałość rozpuścić w 1-2 cm3 eteru naftowego

2. Kolejność warstw w kolumnie: (kolejność dodawania - przygotowanie kolumny chromatograficznej)

•    Wata

•    Na2S04 bezwodny

•    AI203

•    Na2S04 bezwodny

3. Pomiar zawartości beta-karotenu

•    Zmierzyć absorbancję roztworu przy długości fali 451 nm wobec eteru naftowego jako próby „ślepej"

•    Zawartość beta-karotenu odczytać z krzywej wzorcowej, a następnie po uwzględnieniu współczynników rozcieńczeń podać w mikrogramach na 100 g produktu