A = lg 1 / T = lg I, /1,
Prawo Bouguera - Lamberta - Beera - Waltera wyraża wzór:
A = lg 1 / T = lg Io /1, = ad
gdzie : A - absorbancja , c - stężenie roztworu, 1 - grubość warstwy absorbującej (cm), a - współczynnik absorpcji (stosunek absorbancji do iloczynu grubości warstwy i stężenia substancji absorbującej a = A / d).
Stężenie substancji absorbującej można wyrazić w dwojaki sposób:
• jako stężenie molowe c (liczba moli w 1 litrze roztworu) i wtedy
gdzie: £ - molowy współczynnik absorpcji, 1 /(mol x cm),
• jako stężenie masowe p (stosunek masy składnika ( g ) do objętości roztworu zawierającego ten składnik (1) i wtedy
A = a*pl
gdzie: p - właściwy współczynnik absorpcji, 1 /(g x cm).
Jeżeli w roztworze znajduje się więcej substancji absorbujących, to absorbancja całkowita roztworu jest równa sumie absorbancji poszczególnych składników. To podstawowe prawo addytywności absorbancji (po założeniu, że grubość warstwy jest stała) wyraża wzór:
A = A, + A2 + ... + A„ = (£,c, + £2C2 + ... +£,,c„)l Z prawa tego korzysta się w spektrofotometrycznej analizie układów wieloskładnikowymi.
Odstępstwa od prawa absorpcji (prawa Beera)
Odstępstwa od prawa absorpcji mogą być spowodowane :
• zmianami chemicznymi roztworu. Chemiczne odstępstwa wynikają z reakcji przebiegających w roztworze absorbującym w miarę wzrostu stężenia składnika oznaczanego. Zachodzą wtedy reakcje polimeryzacji lub kondensacji cząsteczek lub jonów absorbujących, reakcje między jonem (cząsteczką) absorbującym i rozpuszczalnikiem
lub w przypadku układów wieloskładnikowych dodatkowe reakcje między poszczególnymi składnikami.
• warunkami pomiaru wykonanego za pomocą niezbyt precyzyjnego przyrządu (otrzymywanie nie wystarczająco monocłiromatycznego promieniowania). Za pomocą spektrofotometrów wyższej klasy można mierzyć absorbancje przekraczające wartość 1,0 nie popełniając przy tym dużo większych błędów niż w teoretycznie optymalnym zakresie 0,3 - 0,7.
Aparatura spektrofotometryc/na