108319

Mikrobiologia przemysłowa ćw 12

■    selekcja szczepu po działaniu czynnika mutagennego według warunków, w jakich będziemy potem prowadzić hodowlę

■    mutanty głównie w poszczególnych enzymach z cyklu przemian, otrzymamy szczep z zaburzonymi szlakami metabolicznymi

•    1. dehydrogenaza akonitynowa

•    2. dehydrogenaza izocytrynianowa

•    3. dehydrogenaza 2 -ketoglutaranowa

o rekombinacja genetyczna (wykorzystanie cyklu paraseksualnego) na drodze fuzjo protoplastów. Mogą być też fuzje między różnymi rodzinami (np. A. Niger z Trichoderma). Fuzjant otrzyma :

■    od Aspergillus - duża wydajność procesu produkcji kwasu

■    od Trichoderma : nic jest czuły na obecność glukozy (normalne działanie : produkcja kw. cytrynowego - powstają analogi glukozy -hamują produkcje kw. cytrynowego)

CECHY DOBREGO SZCZEPU PRZEMYSŁOWEGO

nie patogenny (ale Aspergillus jest /może być patogenny, powoduje tzw. aspergilozę -ale przy zbyt częstym kontakcie przy jednocześnie obniżonej odporności organizmu)

-    niskie koszty (w sensie składu podłoża) - łatwo pozyskiwalne i łatwo dostępne surowce

-    wysoka wydajność procesu syntezy przy niezbyt obfitym wytwarzaniu grzybni

-    duża stabilność genetyczna szczepu

o odpowiednie przechowywanie (stosowania liofilizacja) o przechow ywanie konidiów w jałowych pojemn. z cytrynianem wapnia o otrzymywanie konidiów w odpowiedni sposób (pożywki sporulacyjne)

-    nie wytwarzać / wytwarzanie w niewielkich ilościach inne kwasy organiczne (np. szczawiooctan - obniżają one wydajność produkcji)

BIOSYNTEZA Działają dwa szlaki -

EMP (glikoliza) (głównie gdy grzybnia jest w fazie stacjonarnej)

Lub / i pentozofosforanowy (dominuje przy intensywnym rozwoju grzybni)

Szybkość biotransformacji reguluje fosfofruktokinaza (jednocześnie reguluje glikolizę i biotransformację kwasu cytrynowego), hamowana jest przez cytrynian i ATP (więc jest korzystne ich „obejście” w mutagenezie) czyli poprzez skład podłoża (parametr) możemy manipulow ać abv zahamować / wzmocnić działalność enzymów.

Hodow la na odpowiedniej pożywce wyłączającej dehydrogenazy :

-    dla dh. Akonitow ej: deficyt jonów manganu i żelaza

-    dla dh. Izocytrynianowej : wysokie stężenie cytrynianu

-    dla dh. 2 - ketoglutaranowej : wysokie stężenie cukrów i jonów amonu

Cykl glioksolowy - reakcje pomocnicze, wzmacniające (prowadzi do powstania m.in. szczawiooctanu - metabolit bezpośredni cytrynianu)