101907

Udowodnienie, że alfR jest genem regulatorowym:

• Porównano ekspresję genów w typie dzikim i z delecją aflR A. parasiticus z zastosowaniem mikromacierzy (5002 elementów)

O Brak ekspresji (w przypadku 2 genów - aflR koniecznie potrzebny) lub jej spadek większości genów w szczepie w delaflR. co oznacza, że aflR jest niezbędne do ich transkrypcji - oznaczone jako strzałka w dół

o 6 genów ma niezależną regulację (nc - nie ma wpływu) ekspresja regulowana w inny sposób niż aflR

5.2    aflS:

•    geny aflR i aflS leżą blisko siebie, ale są transkrybowane w przeciwną stronę i mają niezależne promotory

•    mogą jednak mieć wspólne miejsca wiążące dla czynników transkrypcyjnych lub innych elementów regulatorowych

Rola aflS nie jest jednoznaczna:

•    U szczepów z delecją aflS powstają produkty pośrednie, ale nie są przekształcane do AF

•    U A. parasiticus AflS wiąże się z AflR i jest niezbędne do jego aktywacji (do aktywacji białka AflS).

3 najważniejsze funkcje białek AflS i AflR:

1.    AflR jest niezbędny do inicjacji transkrypcji na wczesnych, pośrednich i późnych etapach szlaku biosyntezy AF

2.    AflS nasila transkrypcję genów na wczesnych i środkowych etapach syntezy (pomoc w transporcie produktów pośrednich?)

3.    Ponieważ AflS wiąże się z AflR sugeruje, że AflS moduluje ekspresję AF poprzez interakcję z AflR.

W niekorzystnych warunkach środowiskowych

O 37 stC,

O obecność laktozy, o obecność azotanów o pH 8.0

•    ekspresja aflR i aflS nie zawsze wyraźnie się różni od warunków permisywnych (nc = no changes)

Regulacja ekspresji genów klastra AF jest skomplikowana Transkrypt aflS jest zalezny od aflR

5.3    Inne mechanizmy regulacji klastra AF:

•    Istnieje tzw. Namrallyoccuring Antisensetranscript (NAT) - ekspresja 1 z NAT jest odwracalnie skorelowana z ekspresją genu aflD. Wyższa ekspresja NAT dla aflD jest powiązana z niższą produkcją AF.

•    Wewnątrz klastra istnieją miejsca wiążące dla innych czynników transkrypcyjnych, które mogą być ważne w regulacji transkrypcji klastra AF

•    Nowy element cAM P- zależny - CRE1 (A. parasiticus).

Kontrola zewnętrzna klastra aflatoksyny - globalna regulacja metabolizmu w tórnego

1.    Przekazywanie sygnału przez heterotrimeryczne białko G i PKA

2.    Przekazywanie sygnału przez cAMP

3.    Przekazywanie sygnału przez Ras i GTPazę

4.    Rearanżacja (remodeling) chromatyny