71212

Omów metody oceny żywotności komórek

Odróżnienie komórek martwych od żywych - komórki żywe mają ciągłą błonę komórkową i posiadają zdolnośd wydalania dodatnio naładowanych cząstek barwników poza komórkę - błękit trypanu, jodek propidyny, jodek etydyny.

Barwienie cytoplazmy kom. roślinnych: czterochlorek trifenylotetrazolowy - TTC tioctan fluoresceiny - FDA - fluorescencja żywych komórek; błękit Evansa - barwi cytoplazmę martwych komórek.

Badanie aktywności dehydrogenazy mleczanowej (LDH) uwalnianej do podłoża przez komórki martwe.

Barwienie fluorescencyjne:

Calcein AM, Ethidium Homodimer-1 Przenikająca przez błony kalceina AM jest cięta przez esterazy wyst. w żywych komórkach do produktu wykazującego zieloną fluorescencję. Homodimer-1 etydyny (nie ma zdolności przenikania przez błonę kom.) znakuje DNA martwych komórek na czerwono.

SYTO 9, Propidium lodide SYTO wnika przez błonę żywych komórek i znakuje kwasy nukleinowe na zielono. Jodek propidyny również wiąże się z DNA i RNA, ale tylko w martwych komórkach, gdyż żywe dysponują mechanizmami eliminowania barwnika z komórki.