87133

pola powierzchni pod pikiem dla danej substancji w zależności od stężenia tej substancji Metoda / dodatkiem-polega na wykonaniu cliromatogramów badanej próbki oraz takiej samej ilości próbki z dodatkowo wprowadzaną ilością związku oznaczanego.

Metoda wzorca wewnętrznego-jako wzorca wewnętrznego stosuje się substancję której pik na chromatogramie jest położony blisko oznaczonych składników. Odmierzoną ściśle ilość wzorca dodaje się do dokładnie znanej ilości próbki . Zawartość oznaczanego składnika wyznacza się przez porównanie powierzchni piku oznaczanego składnika z powierzchnią ściśle określonej ilości substancji stanowiącej wzorzec wewnętrzny.

-eluat- składnik po rozdzieleniu .obecny w wycieku z kolumny

-elucja i/okratyczna- skład eluentu może być jednakowy przez cały czas chroma tografowani a próbki.

elucja gradientów a-skład eluentu zmienia się podczas chromatografowania próbki.

Pompa stałociśnieniowa-pompy wyporowe i z tłokami - dają stałe pozbawione pulsacji ciśnienie, wadą ich jest zmiana przepływu w czasie pomiam(z powodu oporów kolumny chromatograficznej czy zmiany lepkości eluentu w zależności od temperatury)

Pompa staloprzcplywowa- strzykawkowe (dają przepływ bezpulsacyjny ) lub tłokowe (o mchu posuwisto-zwrotnym dają przepływ stały pozbawiony pulsacji)

detektory-spektrofotometiyczny,    fluorometryczny,    konduktometryczny,

refraktometryczny .detektor do HPLC powinien się charakteryzować-uniwersalnością oznaczania dużej ilości substancji, dobrą czułością ,małą granicą wskazali, niezawodność działania, niewrażliwość na zmiany temperatury i przepływu, łatwość obsługi.

Eluent należy odgazowywać bo - ciecz absorbuje z otoczenia powietrze w warunkach normalnych w stanie równowagi ,gdy ciecz poddajemy wysokiemu ciśnieniu to to powietrze uwalnia się w postaci pęcherzyków powietrza i powoduje to uniemożliwienie analizy zastosowanie HPLC- do analizowania związków biologicznie czynnych( białka .aminokwasy, sterydy) preparatów farmaceutycznych, środków ochrony roślin, związków kompleksowych skomplikowanych mieszanin kationów (np. rozdzielania pierwiastków ziem rzadkich)