8941511297

ĆWICZENIE 3

Rozwiązywanie problemów chromatograficznych - problemy

ZWIĄZANE Z DOZOWANIEM PRÓBKI, KOLUMNĄ, POMPĄ I DETEKTOREM.

Prof dr hab. inż. M. Kamiński, mgr inż. E. Gilgenast, mgr inż. G. Romanik

Pan Marian Kamiński jest pracownikiem Katedry Chemii Analitycznej

Wydziału Chemicznego Politechniki Gdańskiej;

[e-mail]

Panie Ewelina Gilgenast i Grażyna Romanik są doktorantkami na Studium Doktoranckim przy Wydziale Chemicznym Politechniki Gdańskiej;

Cel ćwiczenia

Celem ćwiczenia jest zapoznanie się z najstępującymi zagadnieniami: geneza oraz sposoby rozwiązywania problemów, spotykanych w praktyce i dotyczących kolumny, dozowania, detekcji, elucji gradientowej; zasady postępowania w celu doboru warunków rozdzielania w układach NP-HPLC; metodyka zastosowania chromatografii żelowej (GPC, SEC) do oznaczania rozkładu masy molekularnej polimerów; obserwacja przebiegu rozdzielania barwnych substancji w kolumnie HPLC.

Streszczenie przebiegu ćwiczenia

1.    Zapoznanie Uczestników z alternatywnymi sposobami postępowania, zapewniającymi zapobieganie / eliminację problemów spotykanych w praktyce i dotyczących:

doboru/oceny selektywności, sprawności, rozdzielczości i przepuszczalności kolumny, dozowania bardzo małych i bardzo dużych objętości próbki oraz doboru odpowiedniego rozpuszczalnika roztworu dozowanego do kolumny,

doboru właściwej metody detekcji oraz najkorzystniejszych warunków pracy najważniejszych detektorów stosowanych w HPLC (UV-VIS, RI, FLD),

problemów spotykanych w warunkach elucji gradientowej i sposobów ich eliminacji / minimalizacji : zanieczyszczenie składników eluentu, obecność rozpuszczonego powietrza w cieczach stanowiących składniki eluentu, niedoskonałość systemu synchronizacji pracy zaworów proporcjujących i cyklicznej pracy pompy, nieodpowiednie parametry mieszalnika, „demiksja” składników eluentu w warunkach programowania składu cieczy eluującej, wytrącanie się składników próbki w eluencie o niskiej sile elucyjnej i innych.

2.    Przykład wpływu składu eluentu na retencję i selektywność rozdzielania: chlorofili i karotenoidów zawartych w ekstrakcie roślinnym, albo produktów naftowych, albo mieszanin innych substancji nisko i średnio polarnych (do wyboru przez uczestników grupy) oraz przedstawienie i przedyskutowanie zakresu zastosowania detektora UV-VIS/DAD do zastosowań jakościowych oraz do określania tzw. „czystości pików”;

3.    Przedstawienie metodyki zastosowania chromatografii żelowej do oznaczenia rozkładu masy molekularnej polimeru - kalibracja „nisko-dyspersyjnymi” standardami polimeru, a następnie oznaczenie rozkładu masy cząsteczkowej próbki polimeru (styropian, sztućce, albo fragment obudowy styropianowej).

4.    Wizualna obserwacja przebiegu rozdzielania chlorofili i karotenoidów w kolumnie szklanej w warunkach NP-HPLC z detekcją UV-254, rejestracją w trybie Y-t. oraz kolekcją frakcji - przykład preparatywnego zastosowania HPLC w skali „modelowej”.