8941511308

ĆWICZENIE 1

Przygotowanie chromatografu cieczowego do pracy -

PRZYGOTOWANIE FAZY RUCHOMEJ, INSTALACJA KOLUMNY; ZASADY POSTĘPOWANIA DLA EFEKTYWNEGO STOSOWANIA APARATU.

Cel ćwiczenia

Celem ćwiczenia jest przygotowanie chromatografu cieczowego do pracy. Przygotowanie aparatu obejmuje przygotowanie fazy ruchomej, instalację kolumny chromatograficznej, przygotowanie detektora i stabilizaja warunków chromatograficznych.

Schemat blokowy chromatografu cieczowego, którego elementy poddawane będą omówieniu i przygotowaniu do pracy analitycznej przedstawiono na Rysunku.

SZ

Faza

ruchoma

Nastrzyk

Kolumna -Termostat

Rejestrator

Schemat blokowy chromatografu cieczowego

W celu przygotowania aparatu do pracy należy:

1.    przygotować fazę ruchomą,

2.    zainstalować kolumnę chromatograficzną,

3.    przygotować detektor,

4.    przygotować wzorzec i próbkę do analizy,

5.    ustabilizować warunki chromatograficzne,

6.    zdiagnozować ewentualne problemy chromatograficzne.

ad. 1 Fazą ruchomą w chromatografii cieczowej są pojedyncze rozpuszczalniki lub ich dwu- lub więcej składnikowe mieszaniny. Faza ruchoma, która zostaje wprowadzona do kolumny to eluent, który bezwzględnie musi być pozbawiony rozpuszczonego w cieczy powietrza (zaprezentowane zostaną różne sposoby usuwania powietrza z fazy ruchomej: odgazowanie próżniowe, helem lub za pomocą ultradźwięków). Rodzaj i stosunek ilościowy mieszaniny rozpuszczalników w fazie ruchomej ma bardzo duży wpływ na proces chromatografowania. Omówione zostaną sposoby przygotowania faz ruchomych składających się z dwóch (lub więcej) składników, zawierające dodatki (kwasy nieorganiczne, organiczne i bufory). Przedstawiony zostanie sposób wymiany eluentu. Przez cały czas trwania wymiany eluentu kolumna powinna być odłączona i zastąpiona łącznikiem (dwójnikiem). Kolejna kolumna potrzebna do wykonania oznaczeń, powinna zostać przyłączona w miejsce dwójnika dopiero po upewnieniu się, że cały aparat został poprawnie przepłukany i zawiera eluent, który aktualnie będzie wykorzystywany do analizy. Zawór dozujący w pozycji powinien być w pozycji „inject”.