1629289683

Forma i warunki zaliczenia: Egzamin ustny. Treści programowe przedmiotu:

Lp.	Szczegółowy harmonogram wykładów	Godz.
1.	Znaczenie badań ekspresji genów, poziomy ekspresji oraz informatywność uzyskanych na nich wyników	1
2.	Techniki badania zmian w poziomie transkryptu:	1
3.	Prawidłowe układy eksperymentalne, izolacja RN A	1
4.	Northern blotting;	1
5.	RT-PCR klasyczny i w czasie rzeczywistym;	4
6.	Mikromacierze, SAGĘ;	1
7.	Metody badania ekspresji różnicowej (DD-PCR, SSH).	1
8.	Znaczenie i analiza mikro RNA	2
9.	Techniki badania zmian w poziomie produktu translacji: western blotting, analiza proteomu	3
10.	Analiza modyfikacji potranslacyjnych, aktywności funkcjonalnej białek oraz analiza metabolomu	1
	Razem	15

Ćwiczenia obejmują zapoznanie się z trzema technikami badawczymi: hybrydyzacją northem i western oraz Real Time PCR.

Lp.	Szczegółowy harmonogram ćwiczeń	Godz.
	Technika RT-PCR w czasie rzeczywistym
2.	Izolacja mRNA z tkanek roślinnych - specyfika pracy z RNA, stabilizacja profilu ekspresji genów po pobraniu prób.	3
3.	Odwrotna transkrypcja, oczyszczanie cDNA	3
4.	Projektowanie starterów i sond do reakcji Real-Time PCR - źródła informacji sekwencyjnej, bazy danych sekwencji nukleotydowych, walidacja sekwencji, wykorzystanie oprogramowania do projektowania starterów i sond (Primer Express, File Builder).	4
5.	Reakcja PCR w czasie rzeczywistym - oznaczenie względne ekspresji (Relative Quantification) z wykorzystaniem sond Taqman-MGB oraz fluoroforu SybrGreen, wykorzystanie oprogramowania 7500 System SDS Software.	4
6.	Analiza i interpretacja wyników - odczyty z krzywych standardowych oraz normalizacja ekspresji względem kontroli endogennej, interpretacja biologiczna obserwowanych zjawisk.	4
7.	PCR ze starterami specyficznymi	4
8.	Hybrydyzacja Northern	13
9.	Hybrydyzacja Western
10.	Izolacja białek i elektroforeza w warunkach denaturujących	4
11.	Transfer białek na membrany, blokowanie	2
12.	Inkubacja membran z przeciwciałami, detekcja, analiza obrazów	4
	Razem	45