3184153063

474 R DĄBROWSKA [8]

skurczu związana jest z miozyną, ale nie wyklucza to istnienia również drugiego systemu regulacji związanego z aktyną. Wówczas muszą być przeprowadzone dodatkowe badania (patrz rozdz. 11-3, II-4).

II-2. Kompctycyjna aktywacja aktomiozyny przez miozynę

Test ten służy do wykrywania systemu regulacji związanego z aktyną. Polega on na pomiarach aktywności ATP-azy aktomiozyny lub miofibryli badanych mięśni w obecności i nieobecności jonów wapnia po dodaniu nadmiaru miozyny z mięśni królika. Różnice w poziomie aktywności ATP-azy wskazują na tworzenie kompleksu pomiędzy dodaną miozyną i aktyną znajdującą się w badanym systemie. Wrażliwość na wapń przyrostu aktywności ATP-azy wskazuje na obecność systemu regulacji związanego z aktyną, brak czułości na działanie jonów wapnia wskazuje na brak tego systemu regulacji. Test ten może być zastosowany tylko w przypadku mięśni posiadających niską aktywność ATP-azy aktomiozynowej; w przypadku wysokiego poziomu aktywności ATP-azy wyjściowej trudno jest ocenić jej wrażliwość na działanie jonów wapnia po dodaniu miozyny z mięśni królika.

Obydwa wyżej opisane testy opracowane przez L e h m a n a i wsp. (3,34) pozwalające na identyfikację systemów regulacji skurczu w poszczególnych typach mięśni różnych gatunków zwierząt są bardzo wygodne ze względu na prostotę ich wykonania i możliwość użycia do doświadczeń bardzo małych próbek badanych mięśni. Inną zaletą jest to, że przeprowadza się je stosując systemy kurczliwe (miofibryle lub aktomiozyna), poddawane stosunkowo niewielu manipulacjom prowadzącym do ich izolacji, które mogą powodować zmiany struktury białek lub zmiany w ich stechiometrii.

11-3. Badanie miozyny

Obecność systemu regulacji związanego z miozyną można łatwo wykazać przy użyciu czystej miozyny. W przypadku, kiedy możliwe jest wydzielenie czystej miozyny sprawdza się czy po dodaniu do niej czystej aktyny aktywność ATP-azy otrzymanej w ten sposób syntetycznej aktomiozyny wrażliwa jest na działanie jonów wapnia, tj. czy obserwuje się hamowanie aktywności ATP-azy w nieobecności tych jonów. Uzupełniającym testem jest sprawdzenie, czy preparaty czystej miozyny są zdolne do wiązania jonów wapnia.

11-4. Badanie cienkich filamentów

Izolacja cienkich filamentów umożliwia sprawdzenie, czy w ich obrazie elektroforetycznym znajdują się białka o niskich masach cząsteczkowych odpowiadających składnikom troponiny. Zwykle obecność niskocząstecz-