3893820151

denaturowane przy użyciu ciekłego fenolu. Ostatnim etapem jest dodanie do niemieszającej się fazy wodnej DNA i fenolu, który wytrąca DNA w postaci białych włókienek, które po rozpuszczeniu są gotowe do dalszej obróbki.

Zastosowanie enzymów restrykcyjnych do wykrywania mutacji powodującej anemię sierpowatą

normalny [

gen p-globiny

zmutowany gen |Vglobłny

cięcie enzymem restrykcyjnym

IM Id

I w B

i

brak cięcia enzymem restrykcyjnym

TiT

dwa krótkie prążki (8zyt>ciej wędrują w żelu)

jeden długi prążek (wolniej wędruje w żelu)

1 Wykorzystanie działania enzymów restrykcyjnych w praktyce

2. Fragmentacja DNA wydzielonego z komórek jest niezbędna dla dalszej nad nim pracy, gdyż otrzymane w ten sposób czyste fragmenty DNA zawierają olbrzymie ilości par zasad, a do dalszej obróbki najkorzystniejsze jest otrzymanie fragmentów o długości jednego genu. W tym celu wykorzystuje się nukleazy restrykcyjne wyizolowane z bakterii i charakteryzujące się zdolnością do przecinania DNA jedynie w miejscach występowania określonych, rozpoznawanych jedynie przez dany enzym, krótkich sekwencji zasad. W konsekwencji ich działania otrzymywane są fragmenty:

S Lepkie końce: efekt przecięcia DNA, w taki sposób, że miejsca cięcia w niciach komplementarnych są przesunięte w stosunku do siebie o kilka par zasad, co powoduje powstawanie krótkich odcinków jednoniciowego DNA komplementarnych do siebie.

Sekwencje lepkich końców powstałych w wyniku działania tego samego enzymu są komplementarne i mogą łatwo hybrydyzować ze sobą. W obecności enzymu (ligazy DNA) można takie cząsteczki połączyć kowalencyjnie, co jest wykorzystywane przy rekombinowaniu DNA