ĆWICZENIE 14

DEZYNFEKCJA POWIETRZA W POMIESZCZENIACH ZAMKNIĘTYCH

Zagadnienia szczegółowe:

sposoby uzdatniania powietrza, działanie promieniowania różnego typu na mikroorganizmy zawieszone w powietrzu, rozmieszczenie lamp bakteriobójczych w pomieszczeniach, sposób naświetlania i czas naświetlania, oczyszczanie powietrza przez filtrację, sposoby dezynfekcji chemicznej powietrza, współczynnik fenolowy

Literatura zalecana:

• Krzysztofik B., Ossowska-Cyprzyk K. Ćwiczenia laboratoryjne z mikrobiologii powietrza. Wydawnictwo Politechniki Warszawskiej, Warszawa 1989, Strony:121 - 130, 139-144, 152- 152, 162-170

• Grabińska-Łoniewska A., Słomczyńska B., Rutkowska-Narożniak A., Łebkowska M., Słomczyński T., Zborowska E. Biologia środowiska. Wydawnictwo Seidel-Przywecki Sp. z o.o., Warszawa 2011, Strony: 361-373

Zadanie 1. Dezynfekcja powietrza metodą filtracji

- na powierzchni roboczej (blat) komory laminarnej ustawić dwie otwarte szalki Petriego
z agarem odżywczym na czas 15 minut (metoda sedymentacyjna)

- po zakończeniu ekspozycji (zabraniu) szalek z agarem odżywczym włączyć filtrację

powietrza w laminarze na czas 15 minut

- ponownie umieścić na powierzchni roboczej kolejne dwie otwarte szalki Petriego z agarem

odżywczym na czas 15 minut (metoda sedymentacyjna)

- próbki inkubować w 22^oC przez 72h (przed i po filtracji) i 37^oC przez 48h (przed i po

filtracji)

- określić zanieczyszczenie mikrobiologiczne powietrza przed i po zastosowaniu filtrów
w komorze laminarnej

- ocenić skuteczność dezynfekcji powietrza - porównać liczbę kolonii baterii przed i po

użyciu filtrów w laminarze

Zadanie 2. Dezynfekcja powietrza promieniami ultrafioletowymi ( UV)

- na powierzchni roboczej (blat) boksu mikrobiologicznego ustawić dwie otwarte szalki

Petriego z agarem odżywczym na czas 15 minut (metoda sedymentacyjna)

- po zakończeniu ekspozycji (zabraniu) szalek z agarem odżywczym włączyć lampy UV na

czas 15 minut

- ponownie umieścić na powierzchni roboczej kolejne dwie otwarte szalki Petriego z agarem

odżywczym na czas 15 minut (metoda sedymentacyjna)

- próbki inkubować w 22^oC przez 72h (przed i po UV) i 37^oC przez 48h (przed i po UV)

- określić zanieczyszczenie mikrobiologiczne powietrza przed i po zastosowaniu filtrów
w komorze laminarnej

- ocenić skuteczność dezynfekcji powietrza - porównać liczbę kolonii baterii przed i po

użyciu filtrów w laminarze

Zadanie 3. Określenie działania bakteriobójczego preparatów dezynfekcyjnych

(współczynnik fenolowy) - pokaz

- wykonać szereg rozcieńczeń fenolu (dezynfekcyjny preparat wzorcowy):

• przygotować 1% roztwór fenolu

• do kolejnych probówek wprowadzić: 1, 2, 3, 4, 5, 6 i 7 cm³ 1% roztworu fenolu

• objętość probówek uzupełnić do 10 cm³ roztworem fizjologicznym

- do probówek wprowadzić po 0,2 cm³ zawiesiny bakterii Pseudomonas fluorescens

- inkubować przez 10 minut w temperaturze 37^oC

- po inkubacji przenieść sterylnie przy pomocy pipety automatycznej 0,1 cm³ z każdej

probówki do bulionów odżywczych (zaznaczyć zastosowane stężenia)

- inkubować w temperaturze 37 ⁰C przez 48h

- w analogiczny sposób przeprowadzić badanie lizolu

- ocenić wzrost bakterii w probówkach na podstawie wizualnego stwierdzenia zmętnienia lub

jego braku

- obliczyć współczynnik fenolowy wg wzoru:

Zadanie 4. Ocena bakteriobójczego działania promieni ultrafioletowych (UV) w funkcji

czasu

- na sterylną szalkę Petriego wprowadzić 10 cm³ zawiesin bakteryjnych Escherichia coli,

następnie na drugą sterylną szalkę Pertiego również wprowadzić 10 cm³ Bacillus subtilis
i obie szalki naświetlać promieniami UV zgodnie z danymi zawartymi w tabeli

- pobrać z naświetlanych zawiesin po1 cm³ i wykonać rozcieńczenia odpowiednie dla

każdego czasu naświetlania (zgodnie z tabelą)

- z wybranych rozcieńczeń (dane z tabeli) wykonać posiewy metodą płytek lanych (1cm³

próbki zalać 10 cm³ rozgrzanego/ciekłej pożywki mikrobiologicznego - agar odżywczy, delikatnie wymieszać w celu dokładnego rozprowadzenia próbki w całej objętości pożywki i pozostawić do zatężenia)

- próbki inkubować w temperaturze 37^oC przez 48h

- odczytać wyniki poprzez zliczenie wyrosłych koloni bakterii

- ocenić skuteczność bakteriobójczego działania promieni UV dla bakterii Escherichia coli
i Bacillus subtilis

- porównać skuteczność bakteriobójczego działania promieni UV dla obu bakterii

czas naświetlania [sekundy]	Rozcieńczenia z których należy wykonać posiewy
0	10^-5, 10^-6
10	10^-4, 10^-5
20	10^-3, 10^-^4
30	10^-2, 10^-^3
40	10^-1, 10^-^2
50	10^0, 10^-^1
60	10^0

---