1 16 lutego 2011 Laboratorium Nieznany

background image

Laboratorium mikrobiologiczne

background image

Cel ćwiczenia

• Zapoznanie się z regulaminem ćwiczeń
• Poznanie podstawowego szkła i sprzętu

mikrobiologicznego i sposobów sterylizacji

• Zapoznanie się rodzajami i sposobem

przygotowywania podłoży mikrobiologicznych oraz

metodami hodowli mikroorganizmów

• Mikroskopy stosowane w badaniach

mikrobiologicznych

background image

Podstawowe szkło

• Probówki bakteriologiczne (probówki Falcone)
• Płytki (szalki) Petriego
• Kolby Roux (inne butelki)
• Kolby Erlenmayera

background image

Sprzęt do szczepienia

• Igła bakteriologiczna
• Eza bakteriologiczna
• Głaszczka Drygalskiego
• Palnik

background image

Sprzęt do hodowli

• Termostat
• Wytrząsarka

background image

Sprzęt do sterylizacji

• Suszarka do sterylizacji szkła
• Autoklaw do sterylizacji podłoży

background image

Metody sterylizacji

• Fizyczne
• Chemiczne

background image

Metody fizyczne

Wysoka temperaturą (sucha – wyżarzanie,

opalanie, gorące powietrze i parą wodną –

dekoktacja, pasteryzacja, tyndalizacja, para wodna

pod zwiększonym ciśnieniem - sterylizacja)

Promienie elektromagnetyczne: UV, radiacyjne

(jonizujące)

Sączenie

background image

Metoda chemiczna

Sterylizacja gazowa (tlenek etylenu w mieszaninie

CO

2

, beta-propiolakton, ozon i chlor, fluor –woda)

background image

Kontrola sterylizacji

• Sporotesty (sporal A do autoklawów, sporal S do

suszarek np. stericon plus Bioindicator do

autoklawu zawiera przetrwalniki

Geobacillus

stearothermophilus

w fiolce 2 ml). Po

autoklawowaniu ampułki inkubuje się 48 godz. w

temp. 60± 2

o

C. Nie wysterylizowane jako kontrola.

Jeśli kolor pozostanie czerwono-fioletowy to

sterylizacja poprawna.

background image

Dezynfekcja

• Środki chemiczne (kwasy, zasady, środki

utleniające, alkohole, aldehydy, związki fenoli i ich

pochodne, związki powierzchniowo czynne,

jodofory, chloroheksydyna, sole metali ciężkich)

• Kontrola skażenia powierzchni i powietrza

drobnoustrojami

background image

Zastosowanie podłoży mikrobiologicznych

• Izolacja
• Różnicowanie
• Identyfikacja
• Namnażanie
• Określenie właściwości fizjologicznych,

biochemicznych i hodowlanych

background image

Rodzaje podłoży ze względu na zawartość

składników odżywczych

• Minimalne
• Pełne
• Wzbogacone

background image

Rodzaje podłoży ze względu na skład

chemiczny

• Naturalne
• Półsyntetyczne
• Syntetyczne

background image

Rodzaje podłoży ze względu na konsystencję

• Stałe (zaw. 1,5-2,0% agaru)
• Półpłynne (0,1-0,7 agaru)
• Płynne
• Agar - uniwersalny środek zestalający pożywki

mikrobiologiczne (z morskich krasnorostów

Selidum amansi

)

• Żelatyna (produkt hydrolizy kolagenu)

background image

Rodzaje podłoży ze względu na przeznaczenie

i zastosowanie

• Namnażające
• Wybiórcze
• Namnażająco-wybiórcze
• Izolacyjne
• Różnicujące (identyfikacyjne, diagnostyczne)
• Podłoża „transportowe”

background image

Metody hodowli

•Ze względu na rodzaj podłoża:

- hodowle płynne
- hodowle na podłożu stałym

background image

Hodowle płynne

• W probówkach
• W kolbach
• W butlach
• W fermentorach

background image

Fermentory

background image

Hodowle na podłożach stałych

• Na płytkach Petriego
• Słupkach
• Skosach
• W butlach

background image

Ze względu na czas hodowli oraz dostęp

składników pokarmowych

Hodowle okresowe (zamknięte) – czynniki

ograniczające to wyczerpanie składników

pokarmowych, nagromadzenie metabolitów i zmiana

równowagi jonowej (głównie pH)

Hodowle otwarte (ciągłe) – ciągła kontrola zużycie

substancji odżywczych, przyrost liczby i masy

drobnoustrojów oraz stężenie metabolitów

Hodowle zsynchronizowane – wszystkie osobniki

dzielą się jednocześnie (w tym samym czasie)

background image

Ze względu na stosunek bakterii do tlenu

• Hodowle tlenowców
• Hodowle beztlenowców

background image

Hodowle tlenowców

• Hodowle powierzchniowe
• Hodowle wgłębne (wytrząsarki, fermentory)

background image

Hodowle beztlenowców

Metody fizyczne (warstwa oleju parafinowego, słój

próżniowy, hodowla w atmosferze gazu obojętnego,

przy użyciu zestawu np. „Gas-Pak”)

Metody chemiczne (podłoża zawierające

substancje chemiczne absorbujące tlen np.

pirogallol, chlorek miedziowy lub związki chemiczne

obniżające potencjał oksydo-redukcyjny np. kwas

askorbinowy, siarczyn sodowy)

Metody biologiczne – hodowla na tym samym

podłożu tlenowca i beztlenowca

background image

Mikroskopy do obserwacji mikrobiologicznych

• Świetlny
• Z ciemnym polem widzenia
• Kontrastowo-fazowy
• Ultrafioletowy
• Fluorescencyjny
• Polaryzacyjno-interferencyjny
• Elektronowy transmisyjny
• Skaningowy

background image

Mikroskop świetlny

• Najważniejsze pojęcia dla mikrobiologa to powiększenie

mikroskopu i zdolność rozdzielcza

Powiększeniem mikroskopu to stosunek obrazu pozornego A

,

który widzimy w mikroskopie do wielkości przedmiotu

(iloczyn powiększenia okularu i powiększenia obiektywu)

Zdolność rozdzielcza (najmniejsza odległość pomiędzy

dwoma punktami, przy której widzimy je w mikroskopie

oddzielnie)

• Olejek immersyjny pozwala zwiększyć zdolność rozdzielczą

mikroskopu do 0,19 mikrometra zwiększając aperturę

liczbową obiektywu (suchy – 0,3 mikrometra, „wodny” – 0,24

mikrometra)

• Zastosowanie odpowiednich filtrów lub światła UV może

zwiększyć zdolność rozdzielczą do 0,17 mikrometra

background image

Mikroskop z ciemny polem widzenia

• Pole widzenia ciemne, a obserwowane obiekty –

jasne (kondensor ciemnego pola)

• Stosowany olejek immersyjny (górna soczewka

kondensora a dolna pow. preparatu)

• Zdolność rozdzielcza podobna jak w mikroskopie

świetlnym

• Obserwacje żywych bakterii

krętki

background image

Mikroskop kontrastowo-fazowy

• Bezbarwne obiekty fazowe (przezroczyste)

przekształcane są w obiekty amplitudowe

powodujące zmiany natężenia światła widoczne dla

oka przy zastosowaniu płytki fazowej

• Umożliwia obserwacje żywych bakterii a w

szczególności ich ruchu (bez wybarwiania)

komórki
drożdży

background image

Mikroskop ultrafioletowy

• Stosowane są lampy rtęciowo-kwarcowe
• Poprzez zastosowanie światła UV ( o krótszej fali)

zwiększona została zdolność rozdzielcza do 0,1

mikrometra

dwie kolonie

Streptomyces sp.

background image

Mikroskop fluorescencyjny (luminescencyjny)

• Wykorzystywane zjawisko pobudzania świecenia

preparatów oświetlanych promieniami

ultrafioletowymi po wybarwieniu fluorochromami

(barwniki wysyłające światło o długiej fali po

wzbudzeniu promieniami UV) np. erytrozyną,

oranżem akrydynowym, rodaminą

bakterie
z fluoryzującym
na zielono
białkiem

background image

Mikroskop polaryzacyjno-interferencyjny

• Służy do obserwacji przezroczystych i

pochłaniających światło obiektów

• Zastosowany pryzmat, polaryzator i analizator
• Oglądany przedmiot robi wrażenie przestrzennego

background image

Inne mikroskopy

Mikroskop elektronowy – transmisyjny (wykorzystywane są

trzy elektromagnesy i wiązka elektronów a obraz

przekazywany jest na ekran lub kliszę fotograficzną),

zdolność rozdzielcza 4-10 Å, siatki platynowe zamiast

szkiełka podstawowego, preparaty bardzo cienkie do 0,5

mikrometra, obraz trójwymiarowy

Mikroskop skaningowy (elektrony przechodzą przez cały

preparat a powstały obraz może być fotografowany lub

obserwowany na monitorze) obraz trójwymiarowy, zdolność

rozdzielcza 0,02 mikrometra, obserwacja bakterii i ich

penetracji w komórkach gospodarza

background image

Obrazy z mikroskopu transmisyjnego

Salmonella sp.

pączkujące drożdże(przekrój)

background image

Obrazy z mikroskopu skaningowego

Enterococcus faecalis

Bacillus anthrax

background image

Typ mikroskopu

Oświetlenie
preparatu

Obraz

Zdolność
rozdzielcza

Powiększenia

świetlny

światło
widzialne

światło widzialne
(okular)

0.2 μm

5–1 500 x

fluorescencyjny

ultrafiolet

światło widzialne
(okular)

0.2 μm

5–1 500 x

elektronowy
transmisyjny

strumień
elektronów

światło widzialne
(ekran fluoresc.)

0.2- 1 nm

1000-500 000

elektronowy
skaningowy

strumień
elektronów

elektroniczny
(monitor)

3-10 nm

100-50 000 x

tunelowy

prąd
elektryczny

elektroniczny
(monitor)

001-0.1 nm

10 000 000 x


Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
kk, ART 275 KK, Wyrok z dnia 16 lutego 2011 r
9 16 12 2011 grammaire descrip Nieznany (2)
5 16 marca 2011 Morfologia grz Nieznany
9 16 12 2011 grammaire descrip Nieznany (2)
5 16 marca 2011 Morfologia grz Nieznany
16 Ustalanie wyniku finansowego Nieznany (2)
LaboratoriumProcesorySygnaloweW Nieznany
LaboratoriumPodstawAutomatyki D Nieznany
2 23 lutego 2011 Izolowanie mikroorganizmów z różnych środowisk naturalnych
16 Wspieranie osoby niepelnospr Nieznany (2)
chemia kliniczna cw 1 2011 id Nieznany
Wstęp do filozofii 24 lutego 2011, Nauka, Kulturoznawstwo, Semestr II
MSR MSR 16 Rzeczowe aktywa trwa Nieznany
16 Wytwarzanie podstawowych pol Nieznany (2)
16 Rozpoznawanie stanow biologi Nieznany
16 rozdzial 15 EJCDLTJY3F3I2FKL Nieznany (2)
16 rozdzial 15 zpgg3d2etikxyjv3 Nieznany
lista nr5 EKONOMETRIA1 2011 12 Nieznany

więcej podobnych podstron