13. Transformacja u bakterii

Cel ćwiczenia

•

Wywołanie sztucznej transformacji u Escherichia coli przy przy pomocy plazmidu pGLO
stosując duże stężenie soli w połączeniu z szokiem cieplnym (transformacja chemiczna)

•

Obliczenie wydajności transformacji

Transformacja

•

Proces, podczas którego komórka biorcy pobiera wolny DNA z otaczającego środowiska

•

Transformacja naturalna (zachodząca w środowisku naturalnym) i sztuczna
(przeprowadzana w laboratorium przy zastosowaniu specjalnych zabiegów jak szok
chemiczny lub spowodowany polem elektrycznym - elektropolacja )

•

Aby mogła zajść transformacja osobniki muszą uzyskać tzw. stan kompetencji czyli
zdolność do pobrania DNA

•

Proces pobierania DNA może być podzielony na dwa etapy: wiązanie DNA z powierzchnią
komórki i przechodzenie przez osłony komórkowe

Plazmidy

•

Dodatkowy fragment DNA zazwyczaj kolisty (może być też liniowy), znacznie mniejszy od
chromosomu bakteryjnego zdolny do niezależnej replikacji

•

Mogą kodować różne funkcje np. oporność na antybiotyki (plazmidy opornościowe R),
elementy strukturalne, systemy transportu w błonie komórkowej, zdolność przenoszenia się
z jednej komórki do drugiej w procesie koniugacji.

•

Są powszechnie stosowane w biologicznych technikach związanych z otrzymywaniem
zrekombinowanego DNA.

•

Stanowią wygodny nośnik umożliwiający nabycie nowych cech przez bakterie np.
wykorzystanie nowych źródeł węgla czy cechy oporności na antybiotyki i inne toksyczne
substancje

Schemat transformacji przeprowadzonej w czasie ćwiczenia

GFP - gen kodujący białko fluoryzujące na zielono
bla - gen kodujący białko powodujące odporność na antybiotyk czyli Beta-lactamazę
araC -gen kodujący białko regulatorowe
Ori - origin replikacji czyli początek replikacji

Świecąca meduza Aequorea victoria