ĆWICZENIE III

I.

METODY OZNACZANIA OGÓLNEJ LICZBY DROBNOUSTROJÓW:

1. Metody bezpośrednie – mikroskopowo w komorze Thoma, metodą Breeda oraz przy

pomocy filtrów membranowych.

2. Metody pośrednie – posiew i liczenie kolonii metodą zalewową, posiew powierzchniowy,

oznaczenie najbardziej prawdopodobniej liczby drobnoustrojów (NPL).

II.

MORFOLOGIA GRZYBÓW STRZĘPKOWYCH

Zygomycota

Cechy charakterystyczne:



Grzybnia (mycelium) jednokomórkowa, zawierająca wiele jąder



Rozmnażanie wegetatywne - w zarodni powstają jednokomórkowe zarodniki -

endospory (okrągłe lub owalne)



Rozmnażanie generatywne – zlanie się dwóch odcinków różnych nitek tej

samej grzybni (gamentangia), po ich połączeniu powstaje zygospora, która

kiełkuje w sporangiofor, na końcu którego znajduje się zarodnia.

Przedstawiciele:

Mucor sp. : A – zarodnia z zarodnikami

B – różne kształty kolumeli

Ascomycota

Cechy charakterystyczne:



Wielokomórkowa grzybnia



Rozmnażanie wegetatywne – z grzybni wyrasta strzępka owocująca -

konidiofor, zarodniki zewnętrzne – konidia (egzospory)



Rozmnażanie płciowe – wytworzenie worka (ascus) z zarodnikami

workowymi (ascospory)



Drożdże bezpłciowo rozmnażają się przez pączkowanie, natomiast

płciowo przez zarodniki (ascospory)

Przedstawiciele:

Chaetomium globosum: a)perytecjum, b) worki z zarodnikami, c) zarodniki

Deuteromycota (Fungi Imperfecti)

Cechy charakterystyczne:



Grzyby u których nie stwierdzono rozmnażania płciowego



Grzybnia składająca się ze strzępek rozgałęzionych, wielokomórkowych



Rozmnażanie wegetatywne – wytwarzanie konidiów lub oidiów –

powstających z rozpadu strzępek

Przedstawicele:

2. Znaczenie pleśni i drożdży w przemyśle spożywczym

Część praktyczna

1. Oznaczanie liczby komórek drożdży piekarskich Saccharomyces cerevisiae w komorze

Thoma:

a) po ustawieniu oświetlenia w mikroskopie należy znaleźć siatkę komory, najpierw pod

obiektywem o powiększeniu 10 x, a następnie 40 x,

b) otrzymaną zawiesinę drożdży wytrząsać przez kilka minut, następnie przenieść szybko

pipetą do komory Thoma,

c) obliczyć średnią liczbę komórek w ok. 40 małych kwadracikach, (w sumie ok. 700

komórek),

d) wyliczyć liczbę komórek w 1 cm

3

badanej zawiesiny drożdży.

2. Wykonanie testu na żywotność i odżywienie drożdży

Żywotność

a) na szkiełko przedmiotowe nanieść kroplę zawiesiny drożdży

b) dodać kroplę błękitu metylenowego, delikatnie wymieszać,

c) przykryć preparat szkiełkiem nakrywkowym,

d) oglądać pod mikroskopem przy użyciu obiektywu o pow. 40x

e) policzyć martwe komórki w polu widzenia mikroskopu (komórki martwe barwią się na

kolor szafirowo-niebieski, żywe są bezbarwne)

Odżywienie

a) na szkiełko przedmiotowe nanieść kroplę zawiesiny drożdży

b) dodać kroplę płynu Lugola, delikatnie wymieszać,

c) przykryć preparat szkiełkiem nakrywkowym,

d) oglądać pod mikroskopem przy użyciu obiektywu o pow. 40x

e) policzyć komórki z brunatnymi ziarnistościami (glikogen) w polu widzenia mikroskopu

3. Obserwacje grzybów w hodowlach oraz preparatach mikroskopowych

a) Obejrzeć pod mikroskopem stereoskopowym płytki z przedstawicielami

poszczególnych klas

b) Za pomocą igły mikrobiologicznej sporządzić preparat grzybowy barwiony płynem

Lugola

c) Obejrzeć preparat pod mikroskopem przy małym i średnim powiększeniu.

d) Wykonać rysunek.

Opracowanie wyników

Obserwacje, wyniki i wnioski należy przedstawić w formie sprawozdania