Dw. 8 Antygeny i przeciwciała. Odczyny aglutynacyjne czynne.
1. Antygeny.
Antygenem
nazywamy substancję, która wprowadzona do organizmu immunologicznie kompetentnego,
indukuje powstanie odpowiedzi immunologicznej :
humoralnej (wytwarzanie przeciwciał)
komórkowej (powstanie swoiście uczulonych komórek)
Cechy antygenu:
Immunogennośd – zdolnośd do wywoływania odpowiedzi immunologicznej organizmu
Antygenowośd – zdolnośd do swoistego łączenia się z immunoglobulinami wolnymi (stanowiącymi
receptory limfocytów B) i z limfocytami T
Hapteny:
proste związki chemiczne, np. penicylina, 2,4-dwunitrofenol
wykazują tylko antygenowośd, a nie są immunogenne
w połączeniu z białkami (np. skóry lub albuminą krwi) stają się
antygenami pełnowartościowymi
w odpowiedzi na hapten połączony z nośnikiem limfocyt B rozpoznaje hapten, a limfocyt T nośnik
białkowy
Immunogennośd antygenu:
W immunogenności ważną rolę odgrywają:
wielkośd cząsteczki (im większy antygen białkowy tym dłużej przebywa w organizmie)
budowa cząsteczki
obcośd antygenu dla organizmu (najważniejsza cecha !!!)
droga wprowadzenia antygenu
Adiuwanty – substancje, które hamują resorpcję antygenu z miejsca wstrzyknięcia, chronią przed
enzymami proteolitycznymi i stymulują miejscową reakcję immunologiczną
fosforan i wodorotlenek glinu (ludzie)
niekompletny i kompletny adiuwant Freunda (zwierzęta laboratoryjne)
Antygeny wielowartościowe:
W obrębie jednego antygenu może znajdowad się wiele miejsc wiązanych przez przeciwciała
Miejsca takie nazywamy epitopami lub determinantami antygenowymi
Antygen zawierający wiele epitopów nazywany jest antygenem wielowartościowym
Epitopy mogą byd:
ciągłe – gdy miejsce kontaktu z przeciwciałem obejmuje aminokwasy jednego odcinka
polipeptydowego
nieciągłe – gdy pojedyncze przeciwciało wiąże oddalone od siebie fragmenty łaocucha
polipeptydowego, ale konformacyjnie występujące w pobliżu siebie
2. Przeciwciała (Immunoglobuliny - Ig).
Przeciwciała:
Immunoglobuliny są produktami limfocytów B
Występowanie:
płyny tkankowe
wydzieliny (śluz górnych dróg oddechowych, ślina)
wydaliny (kał)
Stanowią grupę białek pokrewnych względem budowy, lecz bardzo heterogennych pod względem
struktury pierwszorzędowej
Budowa Ig:
4 łaocuchy polipeptydowe połączone mostkami disiarczkowymi:
2 ciężkie H (heavy)
2 lekkie L (light)
częśd zmienna V (variable)
w łaocuchu H kodowana przez geny V, D i J; regiony hiperzmienne i zrębowe
w łaocuchu L kodowana przez geny V i J; regiony hiperzmienne i zrębowe
częśd stała C (constant)
łaocuchu H zawiera 3 domeny: C
H
1, C
H
2, C
H
3 – uczestniczą w wiązaniu dopełniacza oraz w
wiązaniu z receptorem komórkowym
region Fab (Fragmant antigen binding), region Fc (Fragment cristalizable)
Podział immunoglobulin:
Pod względem markerów przeciwciała dzieli się na:
Izotypy – na podstawie różnic w budowie łaocucha H (klasy przeciwciał: IgG, IgM, IgA, IgD, IgE)
Allotypy – na podstawie różnic aminokwasowych w części C łaocuchów polipeptydowych
(różnice osobnicze)
Idiotypy – różnice w części zmiennej V (swoistośd przeciwciał w stosunku do antygenu)
A. Klasa IgG:
podklasy – IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 (różnią się ilością mostków S-S w regionie zawiasowym)
budowa:
monomer, 150 kDa; najliczniej reprezentowane w surowicy, poza tym występują też w
wydzielinach (ślina, łzy, kał)
IgG ma dwa miejsca wiązania antygenu – mówimy, że jest dwuwartościowa
przechodzi przez łożysko – jest to transport czynny; proces zaczyna się w 7 m-cu; konflikt
serologiczny
IgG3 (spontanicznie agreguje), IgG4 (nie wiąże dopełniacza)
główne cechy:
immunoglobulina wtórnej odpowiedzi immunologicznej
najważniejsza w odporności
ważna w odporności biernej
wiąże dopełniacz
Konflikt serologiczny:
matka Rh – dziecko Rh +
► jeśli to druga ciąża może dojśd do wytworzenia przeciwciał anty-Rh, które są w klasie IgG
► u dziecka objawy choroby hemolitycznej noworodków
B. Klasa IgM:
występują tu izoaglutyniny (anty-A, anty-B, anty-AB)
budowa:
pentamer, ok 1 mln Da; 5 podjednostek (2xH, 2xL), dodatkowe aa, jednostki łączą się w
pentamery
dodatkowe mostki S-S
łaocuch J (join) – białko łączące
główne cechy:
immunoglobulina pierwotnej odpowiedzi immunologicznej
pierwsza w filo- i ontogenezie
10 miejsc wiążących antygen (przyjmuje postad kraba)
wiąże dopełniacz
C. Klasa IgA:
podklasy – IgA1, IgA2
surowicza (monomer) – frakcja surowicza, 160 kDa, podobna do IgG
wydzielnicza (dimer) – wydzielana w nabłonkach i błonach śluzowych, bariera błon śluzowych,
odpornośd bierna; ślina, łzy, siara (są tu immunoglobuliny matki, które przekazuje potomstwu),
mleko
budowa wydzielniczej (dimeru):
2xH, 2xL, połączone białkiem J
fragment wydzielniczy – obejmujący 1 i 2 podjednostkę, SP (Secretory Protein), rola –
chroni immunoglobulinę wydzielniczą przed enzymami proteolitycznymi
główne cechy:
ważny element miejscowej obrony przed drobnoustrojami
nie wiąże dopelniacza
występują tu antytoksyny
D. Klasa IgE:
występuje w znikomych ilościach w surowicy, jej stężenie wzrasta w
chorobach alergicznych
nadmiar wytwarzania IgE uwarunkowany jest genetycznie
budowa:
monomer, 190 kDa; dużo węglowodanów, dużo aa siarkowych (Met, Cys), 2xH, 2xL
jednowartościowa – wiąże 1 cząsteczkę antygenu
główne cechy:
udział w nadwrażliwości wczesnej i chorobach pasożytniczych
nie wiąże dopełniacza
szczególne powinowactwo do niektórych komórek – bazofile, komórki tuczne
E. Klasa IgD:
występuje w surowicy w śladowych ilościach
IgD jest zakotwiczona w błonie limfocytu B, integralna częśd komórki
budowa:
monomer, 2xH, 2xL
główne cechy:
znaczenie diagnostyczne
rola receptora na limfocycie B (BCR)
Właściwości
IgG
IgM
IgA
IgE
IgD
Forma
monomer
pentamer
(łao. J)
monomer
dimer
monomer
monomer
Podklasy
IgG 1-4
–
IgA1, IgA2
–
–
Stęż. w surowicy (mg/ml)
8-16
0,5-2
1,4-4
1,7x10
-5
-4,5x10
-4
0,04
Aktywacja dopełniacza
+*
+
–
–
–
Procent wśród Ig surowicy
80%
6%
13%
0-1 %
0,002 %
(* - z wyjątkiem IgG4)
3. Reakcje antygen-przeciwciało.
Reakcje antygen-przeciwciało:
Połączenie antygenu ze swoistym przeciwciałem związane jest z powstawaniem wielu
niekowalencyjnych wiązao między epitopem antygenu a częścią zmienną V
przeciwciała:
wiązania wodorowe
wiązania elektrostatyczne
wiązania Van der Waalsa
wiązania hydrofobowe
Siła wiązania pomiędzy antygenem, a przeciwciałem nazywana jest powinowactwem przeciwciała
Siłę z jaką poliwalentne przeciwciało wiąże się z poliwalentnym antygenem, określono jako
zachłannośd (awidnośd)
Kompleksy antygen-przeciwciało:
in. kompleksy immunologiczne
zdolne do wiązania i aktywowania dopełniacza
jeśli Ag i Ig znajdują się w roztworze w odpowiednich proporcjach – dochodzi do maksymalnego
wiązania obu składników (nie ma w r-r wolnych Ag czy Ig)
kompleks immunologiczny ma wtedy charakter sieci i łatwo precypituje z r-r elektrolitów
obecnośd dopełniacza jest niekorzystna dla precypitacji – aktywacja dopełniacza hamuje
precypitację, a nawet powoduje rozpuszczenie wytrąconych precypitatów
reakcje typu antygen-przeciwciało wykorzystuje się szeroko w diagnostyce medycznej
4. Najważniejsze układy grupowe krwinek czerwonych. Układ grupowy AB0 i Rh.
Układy grupowe krwinek czerwonych:
Na błonie komórkowej krwinek czerwonych człowieka występują liczne struktury o charakterze
antygenów
Znaczenie praktyczne mają te układy grupowe których antygeny są silnie immunogenne lub w
populacji ludzkiej występują naturalne przeciwciała przeciwko danym antygenom np. układ Rh czy
AB0
Inne ważne układy grupowe krwinek:
Kell (duża immunogennośd antygenów tej grupy, występują wyłącznie na ertytrocytach)
Duffy i Kidd (przeciwciała odpornościowe przeciwko antygenom tych układów jest częcto
przyczyną odczynów poprzetoczeniowych)
Lewis
Niektóre antygeny grupowe występują wyłącznie na erytrocytach (np. Rh), inne mogą natomiast
występowad na wszystkich komórkach organizmu oprócz neuronów (np. ABO)
Układ grupowy AB0:
Antygeny mają charakter wielocukrów
Geny regulujące syntezę antygenów AB0 zlokalizowane są na chromosomie 9 w 3 niezależnych loci
zawierających jeden z alleli:
H lub h
A
1
, A
2
, B i 0
Se i se
Geny te kodują transferazy, przenoszące reszty cukrowe na koniec wielocukrowego łaocucha
prekursorowego wbudowanego w błonę erytrocytu lub innej komórki
Istnieją dwa rodzaje łaocuchów prekursorowych, zbudowane z identycznych reszt cukrowych, a
różniące się tylko wiązaniem między koocowymi cukrami łaocucha:
prekursor typu I (wiązanie α1-3-glikozydowe)
prekursor typu II (wiązanie α1-4-glikozydowe)
Na erytrocytach występuje wyłącznie typ II łaocucha, natomiast pozostałe komórki organizmu mają
oba rodzaje prekursorów (z wyłączeniem komórek nerwowych)
Swoistośd antygenu warunkuje pojedynczy cukier znajdujący się na koocu wielocukrowego
łaocucha
Antygen H
(grupa krwi 0) – bezpośredni prekursor antygenów A i B; powstaje po przyłączeniu
cząsteczki fukozy do łaocucha prekursorowego typu I lub II, przy udziale transferazy H
Antygen A
(grupa krwi A) – powstaje po przyłączeniu reszty N-acetylogalaktozaminy do antygenu H,
przy udziale transferazy A
Antygen B
(grupa krwi B) – powstaje po przyłączeniu cząsteczki galaktozy do antygenu H, przy
udziale transferazy B
Antygen
A
B
(grupa krwi AB) – N-acetylogalaktozamina i galaktoza przyłączane są do różnych
łaocuchów na tej samej krwince czerwonej
Gen H
dziedziczy się niezależnie od allelicznych genów A, B, 0
ujawnia się zarówno u homozygot H/H, jak i heterozygot H/h
grupa krwi Bombay lub 0
h
(homozygota h/h występująca rzadko) – brak jest aktywnej
fukozylotransferazy, nie mogą więc powstad łaocuchy H i pomimo obecności aktywnych
transferaz A lub B brak jest syntezy antygenów układu AB0
Gen Se
warunkuje syntezę fukozylotransferazy wykazującej duże powinowactwo do łaocucha
prekursorowego typu I
występuje głównie na powierzchni nabłonków
u osobników o genotypie Se/Se lub Se/se (tzw. wydzielaczy) – częśd antygenów grupowych
(A, B i H) uwalnia się z komórek i jest obecna we wszystkich płynach ustrojowych, z
wyjątkiem płynu mózgowo-rdzeniowego
Naturalne przeciwciała:
W surowicy człowieka występują tzw. naturalne przeciwciała przeciwko antygenom układu AB0
nieobecnym na krwinkach danego osobnika:
anty-A u osoby z grupą krwi B
anty-B u osoby z grupą krwi A
anty-A i anty-B u osoby z grupą krwi O
Przeciwciała te powstają bez uprzedniego kontaktu z antygenem, prawdopodobnie w wyniku
stymulacji powszechnie występującymi w przyrodzie substancjami podobnymi do antygenów AB0
Należą najczęściej do klasy IgM i nie przechodzą przez łożysko
Układ grupowy Rh:
Antygeny tego układu są białkami związanymi z glikoproteiną RhAG (Rh-associated glycoprotein) w
błonie erytrocytu
Kodujące je geny zlokalizowane są w chromosomie 1, w dwóch homologicznych loci: RHD (koduje
antygen D) i RHCE (koduje antygeny C, c, E, e)
Ekspresja antygenów Rh następuje w 6 tygodniu życia płodowego, przy czym występują one tylko
w erytrocytach
Najważniejszym antygenem tego układu jest peptyd D ze względu na silną immunogennośd (osoby
posiadające go określa się jako „Rh-dodatnie”)
20% nie posiada antygenu D i określa się je mianem „Rh-ujemnych”
Przeciwciała anty-Rh
zostają zsyntezowane dopiero w wyniku kontaktu z antygenem Rh w czasie ciąży (konflikt
serologiczny) lub po przetoczeniu krwi niezgodnej w układzie Rh
są przeciwciałami odpornościowymi, należą do klasy IgG1 i przechodzą przez łożysko
Transfuzja krwi:
Uniwersalny dawca – 0Rh-, Uniwersalny biorca – ABRh+
Podczas transfuzji krwi należy przestrzegad następujących zasad:
przetaczana krew musi byd zgodna w układzie AB0 i antygenie D układu Rh
przed przetoczeniem wykonuje się próbę krzyżową - podczas próby, sprawdza się, czy
zachodzi aglutynacja między erytrocytami dawcy a surowicą biorcy oraz surowicą dawcy, a
erytrocytami biorcy (eliminuje to błędy w określeniu grupy i konflikt serologiczny u osób z grupą
„Bombay”)
u osób u których wystąpił kiedyś konflikt serologiczny dobiera się również krew w pozostałych 4
podstawowych antygenach układu Rh i zgodną w antygenie K układu Kell
w bardzo rzadkich przypadkach powstaje konflikt na tle niezgodności w układzie: MNSs – antygeny
S i U, Kidd – antygen Ik, Kell – antygen K
5. Odczyny aglutanacyjne czynne.
Reakcja aglutynacji
– polega na swoistym łączeniu się przeciwciał (aglutynin z antygenem
upostaciowanym), np. komórkami bakterii, grzybów, pierwotniaków, erytrocytami, leukocytami,
płytkami krwi
Aglutynacja jest odczynem dwufazowym:
pierwsza faza – dochodzi do swoistego związania się antygenu z przeciwciałem
druga faza – następuje nieswoiste wykłaczanie się komórek tworzących kompleksy z
przeciwciałami
W odczynie aglutynacji ważna jest:
temperatura
aglutynacja erytrocytów in vitro wymaga zawieszenia ich w 0,85% r-rze NaCl (krwinki
pozostają w postaci zawiesiny pojedynczych komórek dzięki siłom elektrostatycznym)
Erytrocyty posiadają ujemny ładunek na powierzchni dzięki obecności reszt kwasu sjalowego. W
środowisku NaCl przyciągają one kationy, które tworzą otoczkę wokół erytrocytu (potencjał dzeta –
co sprawia, że krwinki odpychają się i są oddalone od siebie o około 25 nm)
Przeciwciała IgM mają miejsca wiążące antygen oddalone o 35nm – łatwo aglutynują krwinki,
natomiast zasięg ramion przeciwciał IgG wynosi 14 nm, w związku z czym nie mogą one połączyd
antygenów na sąsiednich krwinkach i wywoład aglutynacji w standardowych warunkach
Aby ułatwid aglutynacje erytrocytów do środowiska reakcji można wprowadzid:
albuminę – wprowadza ładunek ujemny do chmury kationowej otaczającej erytrocyt
podłoża zawierające żele – działanie podobne do albuminy
protaminę – przyspiesza aglutynację, neutralizując ładunek ujemny erytrocytów
enzymy trawiące powierzchnię krwinki i usuwające reszty kwasu sjalowego np. papaina
odczynnik antyglobulinowy – surowica zawierająca przeciwciała antyglobulinowe np.
królicza surowica przeciw ludzkiej immunoglobulinie – wykrywanie przeciwciał ludzkich
Aglutynacja:
Wyróżniamy dwa typy aglutynacji :
bezpośrednią (czynną) – reakcja przeciwciał z antygenem stanowiącym integralną częśd
komórki np. aglutynacja bakteryjna i erytrocytów
pośrednią (bierną) – antygen nie jest integralną częścią komórki lecz zostaje do niej
przyłączony za pomocą np. kwasu taninowego. aldehydu glutarowego lub samoistnie wiąże
się z komórkami
Wykorzystanie odczynów aglutynacyjnych:
Odczyn aglutynacji erytrocytów – określanie grup krwi u ludzi i zwierząt, diagnostyka
niektórych chorób autoimmunologicznych
Aglutynacja limfocytów – wykrywanie i określanie antygenów zgodności tkankowej