Badanie czystości

Badanie czystości

mikrobiologicznej

mikrobiologicznej

produktów niejałowych

produktów niejałowych

Mikrobiologiczna jakość preparatów

farmaceutycznych – rozdz. 5.1.4.

FPVIII

Produkty lecznicze niejałowe mogą zawierać
określoną liczbę drobnoustrojów i nie powinny
zawierać zdefiniowanych bakterii i niekiedy też
grzybów. Obecność nadmiernej liczby
drobnoustrojów i wydzielanych przez nie
enzymów a także obecność wykluczanych
bakterii może powodować:

•

zniszczenie produktu leczniczego

(substancji czynnej
lub postaci leku),

• może prowadzić do obniżenia lub nawet
zniesienia
leczniczego działania preparatu.

W związku z tym wytwórcy preparatów

leczniczych powinni zapewnić jak najmniejsze

zanieczyszczenie mikrobiologiczne produktu
leczniczego poprzez

wprowadzanie aktualnych

wytycznych Dobrej Praktyki Wytwarzania
(GMP).

Komisje trzech Farmakopei: Farmakopea

Europejska z Farmakopeą Japońską i F. Stanów
Zjednoczonych, w ramach nieformalnego układu
zwanego Grupą Dyskusyjną Farmakopei
postawiły sobie za cel opracowywanie
zharmonizowanych monografii i tekstów
podstawowych. Ponadto
uzgodniono procedurę nowelizacji, zgodnie z
którą wszystkie jednostki będą wprowadzały
zmiany jednocześnie.

Bardzo ważne w trakcie

harmonizacji jest więc poszukiwanie wyboru i
kompromisu.

Harmonizacja daje korzyści

:

•

uproszczenia i racjonalizacji metod

kontroli jakości i
procedur dopuszczania produktów
leczniczych do
obrotu,

• zmniejszeniem liczby badań kontrolnych
i tym samym
obniżeniem kosztów.

Bardzo istotną sprawą jest

wprowadzenie kryterium czystości
mikrobiologicznej dla wszystkich substancji
stosowanych w procesie wytwarzania
produktów leczniczych – substancji czynnych
oraz pomocniczych.

Przyjmuje się, że

czystość mikrobiologiczna dla danej
substancji jeżeli nie jest określona w
monografii szczegółowej, to powinna
odpowiadać kryterium podanemu końcowej
części tabeli 6.

Wprowadzane zmiany w badaniach
mikrobiologicznych i kryteriach akceptacji
dla produktów niejałowych, w pewnym
sensie wymuszone procesem harmonizacji,
powodują duże zamieszanie w przemyśle
farmaceutycznym i zmuszają do
podejmowania dodatkowych wysiłków i
czynności związanych z walidacją metod,
wprowadzaniem zmian w procedurach
analitycznych i dokumentacji
farmaceutycznej.
 

1

. Wprowadzono pełne nazwy podłóż (zamiast

liter),

2

. Wprowadzono jednoznaczne sformułowania, że

opisanych
metod nie stosuje się do produktów
zawierających zdolne do
życia drobnoustroje jako składniki czynne

3

. Alternatywne procedury mikrobiologiczne,

włącznie z
metodami zautomatyzowanymi mogą być
stosowane pod
warunkiem, że

zostanie wykazana ich

równoważność z
metodą farmakopealną.

4

. W przypadku metody oznaczania najbardziej

prawdopodobnej
liczby (NPL), która jest zasadniczo najmniej
dokładną
metodą do określania liczby drobnoustrojów,
przyjęto w met.
zharmonizowanej podejście, że w przypadku
niektórych grup

produktów z bardzo małym zanieczyszczeniem

mikrobiologicznym, NPL może być jednak
metodą
najbardziej właściwą.

5

.

Podczas badania żyzności, zamiast szczepu E.

coli stosuje się
P. aeruginosa. oraz włączono do testów C.
albicans

6

. Dokładnie określono techniki postępowania z

tzw. materiałem
siewnym. (drobnoustroje używane do
zaszczepiania powinny
pochodzić

z nie wyższego niż 5 pasaż

macierzystej serii
siewnej).

7

. Konieczność badania żyzności każdej serii

gotowego podłoża
i każdej serii podłoża (

zmniejszono nieco liczbę

komórek

drobnoustrojów w inokulum - nie więcej niż
100 CFU).

8

. Ze względu na duży błąd w wynikach testów

mikrobiologicznych zamiast pojęcie „walidacja
metody”,
zasadniczo

przyjęto określenie „przydatność

metody do
określonego celu”.

(taka przydatność metody

musi być
potwierdzona, jeżeli wprowadzi się zmianę w
metodyce
badania lub w produkcie, która może wpływać
na ten wynik.

10

.

Przyjęto następujące

kryterium akceptacji

dla jakości
mikrobiologicznej:
gdy kryterium jest 10 CFU, to maksymalna
dopuszczalna
liczba koloni = 20; gdy 10² CFU, to
maksymalnie dopuszcza
się 200 CFU, a gdy 10³ CFU, to maksymalna
dopuszczalna
liczba to 2000 kolonii, itd.

11

. Wprowadzono nową kategorię produktu

leczniczego -

płyny

lub formy stałe w postaci aerozolu

12

. Określono sytuacje,

kiedy można prowadzić

badania na
zmniejszonej ilości produktu

a nie na

zazwyczaj przyjętej
ilości, tzn. 10g lub 10ml produktu, 10
opakowań aerozoli, 10
systemów transdermalnych. (w przypadku
produktów, gdzie
ogólna liczba jednostek w serii jest mniejsza
niż 200 (badania
kliniczne), wielkość próbki może być
zmniejszona do 2
jednostek lub nawet 1 jednostki, jeżeli
wielkość serii jest
mniejsza niż 100.

Wprowadzone zmiany harmonizacyjne
dotyczą również bardzo istotnej sprawy –

przyjęcia nowego podejścia w liczeniu
komórek bakterii i grzybów.

Pojęcie: ogólna liczba drobnoustrojów
tlenowych (

TAMC - total aerobic

microbial count

) oznacza liczbę kolonii

(CFU – colony forming unit) znalezionych
na podłożu agarowym z hydrolizatem
kazeiny i soi, przy czym jeżeli kolonie
grzybów są wykrywane na tym podłożu,
zaliczane są do części TAMC. Zasadniczo
jednak na podłożu tym rosną kolonie
bakterii, stąd liczba TAMC świadczy o
liczbie komórek bakteryjnych. Jeżeli liczba
drobnoustrojów jest określana metodą
najbardziej prawdopodobnej liczby (NPL),
otrzymany wynik odpowiada liczbie
TAMC.

Pojęcie: ogólna, łączna liczba drożdży

i pleśni

(TYMC - total yeast/moulds count

) jest

równa liczbie kolonii znalezionych na
podłożu agarowym Sabouraud z
dekstrozą.

Jeżeli kolonie bakterii są wykrywane

na tym podłożu, zaliczane są do części
TYMC. W pewnych sytuacjach, gdy można
spodziewać się, że wartość TYMC
przekroczy przyjęte kryterium akceptacji
w związku ze wzrostem bakterii, można
użyć podłoże agarowe Sabouraud z
dekstrozą zawierające antybiotyki (nie
określono jakie antybiotyki i w jakim ich
stężeniu).

Tabela 6. Zharmonizowane kryteria akceptacji dla
mikrobiologicznej jakości produktów niejałowych i
substancji do celów farmaceutycznych (wg FP VIII)
część 1

----------------------------------------------------------------------------------------------
----------------------
 Droga

TAMC

-ogólna liczba

T

YMC

-ogólna

liczba

Drobnoustroje

podania

drobnoustrojów tlenowych pleśni i

drożdży

określone

CFU/g lub CFU/ml

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
----------

Preparaty doustne

10³ 10²

Nieobecność

nie zawierające wody

E.coli w 1 g/ml

----------------------------------------------------------------------
------------------

Preparaty doustne

10²

10¹

Nieobecność

zawierające wodę

E.coli w 1 g/ml

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
--

Podanie doodbytnicze

10³

10²

---------------------

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
----------

Podanie na śluzówkę

10²

10¹

Nieobecność

jamy ustnej, na dziąsła,
S.aureus i P.aeruginosa
skórę, donosowo, do ucha
w 1g/ml

Tabela 6. Zharmonizowane kryteria akceptacji dla
mikrobiologicznej jakości produktów niejałowych i
substancji do celów farmaceutycznych (wg FP VIII)
– część II

----------------------------------------------------------------------
-----------------
Podanie

dopochwowe

10²

10¹

Nieobecność

P.aeruginosa,

S.aureus,

C.albicans w 1g lub 1ml
--------------------------------------------------------------------------------------------------------
--------
System transdermalny

10²

10¹

Nieobecność
(wartość graniczna dla
P.aeruginosa, S.aureus,
plastra łącznie z warstwą
w jednym plastrze
adhezyjną i zewnętrzną
warstwą nośną)
--------------------------------------------------------------------------------------------------------
--------
Podanie wziewne (specjalne

10²

10¹

Nieobecność
wymagania dla płynnych
P.aeruginosa, S.aureus,
preparatów do neubulizacji)
bakterie Gram- tolerujące
żółć
w 1g/ml
--------------------------------------------------------------------------------------------------------
-------

Tabela 6. Zharmonizowane kryteria akceptacji....
Część III

--------------------------------------------------------------------
-----------------

Doustne postaci leku zawierają-

10 do 4

10²

Nie więcej niż 10²

cych surowce pochodzenia
CFU bakterii Gram-
naturalnego, których nie poddaje
tolerujących żółć w 1g
się wstępnej obróbce zmniejsza-
lub w 1ml, nieobecne
jącej liczbę drobnoustrojów i dla
Salmonella w 10g/ml,
których organ upoważniony
nieobecne E.coli i
dopuszcza TAMC surowców
S.aureus w 1g/ml
powyżej

10³ CFU w 1g/ml

-----------------------------------------------------------------------------------
--------

Ziołowe produkty lecznicze 10 do 7 10 do 5

Nie więcej niż 10²

zawierające wyłącznie 1 lub więcej
CFU E.coli w 1g/ml
Substancji roślinnych (w całości,
(załącznik)
w częściach lub sproszkowane):
ziołowe produkty lecznicze
poddawane przed użyciem
działaniu wrzącej wody;

Tabela 6.

Zharmonizowane kryteria akceptacji dla

mikrobiologicznej jakości produktów niejałowych i
substancji do celów farmaceutycznych (wg FP VIII)
–

Część IV

------------------------------------------------------------------------------------------------------
-
Droga podania

TAMC

-ogólna liczba

TYMC

-ogólna liczba

Drobnoustroje
drobnoustrojów tlenowych pleśni i
drożdży określone
CFU/g lub CFU/ml
-----------------------------------------------------------------------------------
--------------------
Ziołowe produkty lecznicze 10 do 5 10 do4
Nie więcej niż niepoddawane przed użyciem
10² CFU bakterii

Gram- tolerujących
działaniu wrzącej wody;
żółć w 1g lub w 1ml

nieobecne E.coli w

1g/ml i Salmonella w

10g/ml
------------------------------------------------------------------------------------------------------
-------
Niejałowe substancje do

10³

10²

celów farmaceutycznych

Poza drobnoustrojami wymienionymi

w Tabeli oceniane jest także znaczenie
innych drobnoustrojów w zależności od

:

• użycia produktu: ryzyko różni się zależnie od
drogi i sposobu
podania (oko, nos, drogi oddechowe),

• właściwości produktu: jego zdolności do
podtrzymywania
wzrostu, obecność właściwej ochrony
przeciwdrobnoustrojowej,

• docelowej grupy pacjentów: ryzyko różne dla
pacjentów
różnych grup (np. noworodków, osób z
upośledzoną
odpornością, osób w podeszłym wieku),

• stosowania dodatkowego leczenia (np.
immunosupresyjnego,
przeciwzapalnego),

• występowania dodatkowych chorób, ran,
uszkodzeń
narządów.

Etapy badania czystości

Etapy badania czystości

mikrobiologicznej

mikrobiologicznej

1.

1.

Zakwalifikowanie preparatu wg FPVIII tom I (

Zakwalifikowanie preparatu wg FPVIII tom I (

5.1.4

5.1.4

),

),

2.

2.

Wybór metody badania,

Wybór metody badania,

3.

Sprawdzenie jałowości

i żyzności podłoży

i żyzności podłoży

wykorzystywanych w badaniu,

wykorzystywanych w badaniu,

4.

4.

Wykonanie badania

Wykonanie badania

a/ Oznaczanie całkowitej liczby zdolnych do życia

a/ Oznaczanie całkowitej liczby zdolnych do życia

drobnoustrojów tlenowych wg FPVII tom I

drobnoustrojów tlenowych wg FPVII tom I

(

(

2.6.12

2.6.12

)

)

b/ Badanie obecności określonych drobnoustrojów

b/ Badanie obecności określonych drobnoustrojów

wg

wg

FPVIII tom I (

FPVIII tom I (

2.6.13

2.6.13

)

)

Wybór metody badania

Wybór metody badania

1.

1.

Badanie metodą posiewu

Badanie metodą posiewu

bezpośredniego

bezpośredniego

2.

2.

Badanie metodą posiewu

Badanie metodą posiewu

bezpośredniego z zastosowaniem

bezpośredniego z zastosowaniem

substancji neutralizujących działanie

substancji neutralizujących działanie

przeciwdrobnoustrojowe produktu

przeciwdrobnoustrojowe produktu

3.

3.

Badanie metodą filtracji

Badanie metodą filtracji

Przed przystąpieniem do badań należy

Przed przystąpieniem do badań należy

wybraną metodę zwalidować oraz

wybraną metodę zwalidować oraz

sprawdzić jałowość i żyzność podłoży

sprawdzić jałowość i żyzność podłoży

Sprawdzenie żyzności

Sprawdzenie żyzności

podłoży

podłoży

Szczepy testowe stosowane do badania

Szczepy testowe stosowane do badania

żyzności

żyzności



Staphylococcus aureus jak ATCC 6538

Staphylococcus aureus jak ATCC 6538



Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa



Escherichia coli

Escherichia coli



Salmonella enterica ssp.enterica serotyp

Salmonella enterica ssp.enterica serotyp

typhimurium,

typhimurium,



Salmonella enterica ssp.enterica serotyp serotyp

Salmonella enterica ssp.enterica serotyp serotyp

abony,

abony,



Candida albicans

Candida albicans



Clostridium sporogenes

Clostridium sporogenes

Wykonanie badania

Wykonanie badania

Przygotowywanie próbek

Przygotowywanie próbek

Próbki należy pobierać według odpowiednio opracowanego

Próbki należy pobierać według odpowiednio opracowanego

planu, który powinien uwzględniać m.in.:

planu, który powinien uwzględniać m.in.:



wielkość serii,

wielkość serii,



charakterystykę produktu:

charakterystykę produktu:

1. produkt rozpuszczalny w wodzie,

1. produkt rozpuszczalny w wodzie,

2. produkt niezawierający tłuszczów,

2. produkt niezawierający tłuszczów,

3. produkt nierozpuszczalny w wodzie,

3. produkt nierozpuszczalny w wodzie,

4. produkty

4. produkty zawierające

tłuszcze,

tłuszcze,

5. płyny lub formy stałe w postaci aerozolu,

5. płyny lub formy stałe w postaci aerozolu,

6. systemy transdermalne)

6. systemy transdermalne)



spodziewany poziom zanieczyszczenia.

spodziewany poziom zanieczyszczenia.

Przygotowywanie próbek –

Przygotowywanie próbek –

cd.

cd.

10 g lub 10 ml badanego preparatu do badań w

10 g lub 10 ml badanego preparatu do badań w

kierunku całkowitej liczby zdolnych do życia

kierunku całkowitej liczby zdolnych do życia

drobnoustrojów tlenowych oraz badanie obecności:

drobnoustrojów tlenowych oraz badanie obecności:



bakterii Gram-ujemnych

bakterii Gram-ujemnych

,

,

tolerujących żółć,

tolerujących żółć,



E. coli,

E. coli,



Salmonella,

Salmonella,



P. aeruginosa

P. aeruginosa

,

,



S. aureus

S. aureus

,

,



Clostridia,

Clostridia,



Candida albicans

Candida albicans

należy rozpuścić lub zawiesić w zbuforowanym

należy rozpuścić lub zawiesić w zbuforowanym

roztworze chlorku sodu z peptonem o pH 7,0 w

roztworze chlorku sodu z peptonem o pH 7,0 w

objętości 100 ml

objętości 100 ml

Oznaczanie całkowitej liczby

Oznaczanie całkowitej liczby

zdolnych do życia

zdolnych do życia

drobnoustrojów tlenowych

drobnoustrojów tlenowych

Całkowitą liczbę zdolnych do życia

Całkowitą liczbę zdolnych do życia

drobnoustrojów tlenowych (bakterii i grzybów)

drobnoustrojów tlenowych (bakterii i grzybów)

oznaczamy w odniesieniu do 1g lub 1 ml

oznaczamy w odniesieniu do 1g lub 1 ml

badanego produktu, korzystając z próbki

badanego produktu, korzystając z próbki

przygotowanej w zbuforowanym roztworze

przygotowanej w zbuforowanym roztworze

chlorku sodu z peptonem o pH 7,0.

chlorku sodu z peptonem o pH 7,0.

Odpowiednią

Odpowiednią

ilość posiewamy w kierunku:

ilość posiewamy w kierunku:



bakterii

bakterii

na

na

agar z hydrolizatem kazeiny i

agar z hydrolizatem kazeiny i

soi

soi

-

-

temp. 30-35

temp. 30-35





C

C



grzybów na agar Sabouraud- temp.

grzybów na agar Sabouraud- temp.

20-25

20-25





C

C



inkubacja przez 5 dni

inkubacja przez 5 dni

Oznaczanie całkowitej liczby zdolnych

Oznaczanie całkowitej liczby zdolnych

do życia drobnoustrojów tlenowych –

do życia drobnoustrojów tlenowych –

cd.

cd.

Oznaczenie to można wykonywać

Oznaczenie to można wykonywać

:

:

1.

1.

metodą posiewu bezpośredniego:

metodą posiewu bezpośredniego:



technika płytek lanych,

technika płytek lanych,



technika posiewu

technika posiewu

powierzchniowego.

powierzchniowego.

2.

2.

metodą z użyciem sączków

metodą z użyciem sączków

membranowych

membranowych

3.

3.

metoda oznaczenia najbardziej

metoda oznaczenia najbardziej

prawdopodobnej liczby - NPL

prawdopodobnej liczby - NPL

Metodą oznaczania najbardziej

Metodą oznaczania najbardziej

prawdopodobnej liczby (NPL) - metoda ta

prawdopodobnej liczby (NPL) - metoda ta

polega na przygotowaniu serii co najmniej

polega na przygotowaniu serii co najmniej

trzech 10-krotnych rozcieńczeń produktu, z

trzech 10-krotnych rozcieńczeń produktu, z

których pobiera się próbkę 1 ml, posiewa do

których pobiera się próbkę 1 ml, posiewa do

bulionu z hydrolizatem kazeiny i soi Jeśli to

bulionu z hydrolizatem kazeiny i soi Jeśli to

konieczne można dodać do podłoża związek

konieczne można dodać do podłoża związek

powierzchniowo-czynny taki jak polisorbat

powierzchniowo-czynny taki jak polisorbat

80 lub substancję neutralizującą czynniki

80 lub substancję neutralizującą czynniki

przeciwdrobnoustrojowe. Wszystkie

przeciwdrobnoustrojowe. Wszystkie

probówki inkubuje się w temperaturze 30-

probówki inkubuje się w temperaturze 30-

35

35





C nie dłużej niż 3 dni; następnie

C nie dłużej niż 3 dni; następnie

odnotowuje się liczbę próbek, w których

odnotowuje się liczbę próbek, w których

wykazano wzrost drobnoustrojów i wynik

wykazano wzrost drobnoustrojów i wynik

interpretuje się wg tabeli zamieszczonej w

interpretuje się wg tabeli zamieszczonej w

FP.

FP.

W

W przypadku niektórych grup

produktów z bardzo małym
zanieczyszczeniem mikrobiologicznym, NPL
może być jednak metodą najbardziej
właściwą.

Badanie nieobecności bakterii

Badanie nieobecności bakterii

Gram-ujemnych, tolerujących żółć

Gram-ujemnych, tolerujących żółć



Z próbki przygotowanej w

Z próbki przygotowanej w bulionie z

hydrolizatem kazeiny i soi po reaktywacji przez

2 godz.

pobrać ilość odpowiadającą 1 g lub 1 ml

pobrać ilość odpowiadającą 1 g lub 1 ml

produktu wprowadzić do płynnego bulionu

produktu wprowadzić do płynnego bulionu

Mossela wzbogaconego dla pałeczek

Mossela wzbogaconego dla pałeczek

jelitowych),

jelitowych),



inkubować 24-48 h w temperaturze 30-35

inkubować 24-48 h w temperaturze 30-35





C.

C.



przesiać na agar z fioletem krystalicznym,

przesiać na agar z fioletem krystalicznym,

czerwienią obojętną, żółcią i glukozą,

czerwienią obojętną, żółcią i glukozą,

inkubować 18-24 h w temperaturze 30-35

inkubować 18-24 h w temperaturze 30-35





C.

C.

Produkt spełnia wymagania jeśli nie

Produkt spełnia wymagania jeśli nie

obserwuje się wzrostu kolonii.

obserwuje się wzrostu kolonii.

Badanie

Badanie ilościowe w kierunku bakterii

Gram-ujemnych, tolerujących żółć

Gram-ujemnych, tolerujących żółć



Z próbki przygotowanej w bulionie z hydrolizatem

kazeiny i soi po reaktywacji przez okres 2

godz.pobrać ilość odpowiadającą 0,1 g, 0,01 g,

0,001 g (lub 0,1 ml; 0,01 ml; 0,001 ml) i wprowadzić

do bulionu Mossela, inkubować 24-48 h w

temperaturze 30-35C.



przesiać na płytki agarowe z fioletem krystalicznym,

czerwienią obojętną, żółcią i glukozą, inkubować

18-24 h w temperaturze 30-35C.

Odnotować najmniejszą ilość produktu, dla

której otrzymano wynik dodatni, oraz

największą ilość produktu, dla której

otrzymano wynik ujemny.

Prawdopodobną liczbę

bakterii należy odczytać z tabeli zamieszczonej w FP.

Wyniki dla

Wyniki dla

każdej

każdej

produktu

produktu

ilości

ilości

Prawdopodob

Prawdopodob

na liczba

na liczba

bakterii w g

bakterii w g

lub ml

lub ml

produktu

produktu

0,1g lub
0,1ml

00,1g lub
0,01 ml

0,001g

lub

0,001 ml

+

+

+

+

+

+

>10³

>10³

+

+

+

+

_

_

<10

<10

³ i >10²

³ i >10²

+

+

_

_

_

_

<10

<10

² i >10

² i >10

_

_

_

_

_

_

<10

<10

Interpretacja wyników

oznaczenie prawdopodobnej liczby bakterii

Badanie obecności

Badanie obecności

E. coli

E. coli



Z próbki w zbuforowanym roztworze chlorku

Z próbki w zbuforowanym roztworze chlorku

sodu pobrać ilość odpowiadającą 1 g lub 1 ml

sodu pobrać ilość odpowiadającą 1 g lub 1 ml

i zaszczepić 100 ml bulionu z hydrolizatem

i zaszczepić 100 ml bulionu z hydrolizatem

kazeiny i

kazeiny i soi

,

,



inkubować 18-24 h w temperaturze 30-35

inkubować 18-24 h w temperaturze 30-35





C

C



wymieszać i przenieść 1 ml do bulionu

wymieszać i przenieść 1 ml do bulionu

MacConkeya,

MacConkeya,



inkubować 24-48 h w temperaturze 42-44

inkubować 24-48 h w temperaturze 42-44





C.

C.



przesiać na płytki z agarem MacConkeya i

przesiać na płytki z agarem MacConkeya i

inkubować 18-72 h w temperaturze 30-35

inkubować 18-72 h w temperaturze 30-35





C.

C.

Wzrost kolonii świadczy o możliwej obecności

Wzrost kolonii świadczy o możliwej obecności

E.

E.

coli.

coli.

Wynik potwierdzić badaniami identyfikacyjnymi

Wynik potwierdzić badaniami identyfikacyjnymi

Badanie obecności

Badanie obecności

Pseudomonas

Pseudomonas

aeruginosa

aeruginosa



Z próbki w zbuforowanym roztworze chlorku

Z próbki w zbuforowanym roztworze chlorku

sodu pobrać ilość

sodu pobrać ilość odpowiadającą

1 g lub 1 ml i

1 g lub 1 ml i

zaszczepić 100 ml bulionu z hydrolizatem

zaszczepić 100 ml bulionu z hydrolizatem

kazeiny i soi,

kazeiny i soi,



inkubować 18-24 h w temperaturze 30-35

inkubować 18-24 h w temperaturze 30-35





C.

C.



przesiać na płytkę agaru z cetrymidem.

przesiać na płytkę agaru z cetrymidem.



inkubować 18-72 h w temperaturze 30-35

inkubować 18-72 h w temperaturze 30-35





C.

C.



Wzrost kolonii świadczy o możliwej obecności

Wzrost kolonii świadczy o możliwej obecności

Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa

Produkt spełnia wymagania jeżeli nie

Produkt spełnia wymagania jeżeli nie

obserwuje się pojawienia kolonii lub gdy

obserwuje się pojawienia kolonii lub gdy

badania identyfikacyjne są ujemne.

badania identyfikacyjne są ujemne.

Badanie obecności

Badanie obecności

Staphylococcus

Staphylococcus

aureus

aureus



Z próbki w zbuforowanym roztworze chlorku

Z próbki w zbuforowanym roztworze chlorku

sodu pobrać ilość odpowiadającą 1 g lub 1 ml i

sodu pobrać ilość odpowiadającą 1 g lub 1 ml i

zaszczepić 100 ml bulionu z hydrolizatem

zaszczepić 100 ml bulionu z hydrolizatem

kazeiny i soi,

kazeiny i soi,



inkubować 18-24 h w temperaturze 30-35

inkubować 18-24 h w temperaturze 30-35





C.

C.



przesiać na płytkę agaru z mannitolem i

przesiać na płytkę agaru z mannitolem i

chlorkiem sodu, inkubować 18-72 h w

chlorkiem sodu, inkubować 18-72 h w

temperaturze 30-35

temperaturze 30-35





C.

C.

Na prawdopodobna obecność S.aureus wskazują

Na prawdopodobna obecność S.aureus wskazują

żółte/białe kolonie otoczone żółtą strefą.

żółte/białe kolonie otoczone żółtą strefą.

Wynik potwierdzić badaniami

Wynik potwierdzić badaniami

identyfikacyjnymi

identyfikacyjnymi

Badanie obecności

Badanie obecności

Salmonella

Salmonella



Z próbki przygotowanej w bulionie z

Z próbki przygotowanej w bulionie z

hydrolizatem

hydrolizatem

kazeiny

kazeiny

i soi),

i soi),

po 24 h

po 24 h

inkubacji przenieść 1 ml do 10 ml bulionu

inkubacji przenieść 1 ml do 10 ml bulionu

Rappaporta Vassiliadisa wzbogaconego dla

Rappaporta Vassiliadisa wzbogaconego dla

Salmonella, inkubować 18-24 h w

Salmonella, inkubować 18-24 h w

temperaturze 30-35

temperaturze 30-35





C.

C.



przesiać na płytkę agaru z ksylozą, lizyną i

przesiać na płytkę agaru z ksylozą, lizyną i

deoksycholanem, inkubować 18-48 h w

deoksycholanem, inkubować 18-48 h w

temperaturze 30-35

temperaturze 30-35





C.

C.

1

1

.

.

Wzrost charakterystycznych czerwonych kolonii

Wzrost charakterystycznych czerwonych kolonii

z czarnymi środkami lub bez nich wskazuje na

z czarnymi środkami lub bez nich wskazuje na

prawdopodobną obecność

prawdopodobną obecność

Salmonella

Salmonella

.

.

2. Wynik potwierdzić badaniami identyfikacyjnymi

2. Wynik potwierdzić badaniami identyfikacyjnymi

Badanie w kierunku Candida albicans



Z próbki w zbuforowanym roztworze

Z próbki w zbuforowanym roztworze

chlorku sodu pobrać ilość

chlorku sodu pobrać ilość

odpowiadającą 1 g lub 1 ml i dodać do

odpowiadającą 1 g lub 1 ml i dodać do

100 ml bulionu Sabouraud z dekstrozą

100 ml bulionu Sabouraud z dekstrozą

i zamieszać,

i zamieszać,



inkubować 3-5 dni w temperaturze

inkubować 3-5 dni w temperaturze

30-35

30-35





C.

C.



przesiać na płytkę z agarem

przesiać na płytkę z agarem

Sabouraud z dekstrozą i inkubować

Sabouraud z dekstrozą i inkubować

24-48 h w temperaturze

24-48 h w temperaturze

30-35

30-35





C.

C.

Wzrost białych kolonii może wskazywać

Wzrost białych kolonii może wskazywać

na obecność

na obecność

C.albicans

C.albicans

.

.

Wynik potwierdzić badaniami

Wynik potwierdzić badaniami

identyfikacyjnymi

identyfikacyjnymi

Dziękuję za
uwagę