Badanie

Badanie

bakteriologiczn

bakteriologiczn

e

e

mleka

mleka

Diagnostyka mastitis

Dane z wywiadu



Warunki zoo., technika i higiena
pozyskiwania mleka, częstotliwość
występowania zapaleń klinicznych i
podklinicznych

Badanie kliniczne
Badanie laboratoryjne



SCC



bakteriologia

Diagnostyka

mikrobiologiczna

Diagnostyka konwencjonalna
Kity-rozpoznawanie i kwalifikacja
nowych gatunków
Precyzyjne met.
Radioimmunologiczne i
immunoenzymatyczne

Diagnostyka

mikrobiologiczna

Podstawowa i najlepsza metoda to

IZOLACJA ORAZ IDENTYFIKACJA PO

WYSIANIU POBRANEGO MATERIAŁU
NA ODPOWIEDNIE PODŁOŻE

(problem fałszywie + i – wyniki



Okresowe pojawianie się drobnousroju lub mała ilość
>>>>mikroskopowe badanie rozmazu



Kontaminacja-wzrost 2 rodzajów koloni=infekcja mieszana; 3
wskazują na zanieczyszczenie

Diagnostyka

mikrobiologiczna

Rutynowo inkubujemy płytki 24-48 h/
37 C
Próbki zawierające malo swieżych
bakterii powinny być wstępnie
inkubowane 4-24 h

Co i jak badać?

20 % nowych przypadków mastitis
Każdy przypadek niepodatny na
terapię
Przypadki nietypowe-UWAGA-
mykoplazmy nie rosna na rutynowo
stosowanych pożywkach

Materiał do badań

laboratoryjnych

Mleko ćwiartkowe
Mleko wymieniowe
Mleko zbiorcze (bańkowe, zbiornikowe)

Mleko przeddojowe, dojowe, międzydojowe

Mleko zatokowe, pęcherzykowe, resztkowe

DO BADAŃ W KIERUNKU MASTITIS POBIERAĆ

2-3 GODZINY PO DOJU

ZASADY PBIERANIA PRÓBEK

Pobiera osoba kompetentna (lek. Wet.)
Próbek nie konserwujemy
Jałowe probówki odpowiednio oznakowane
Przygotowane wymię: oczyścić (umyć

wysuszyć), zdezynfekować (zanurzyć na 30

sek.) i osuszyć, przetrzeć 70%alkoholem
Dezynfekujemy od najdalszych, pobieramy od

najblizszych
Na 30 min przed planowanym pobraniem nie

powinno się wykonywać w oborze żadnych

innych czynności (kurzenie-kontaminacja)
Technika pobrania...

ZASADY PBIERANIA PRÓBEK

Próbki zbiorcze-po dokładnym
wymieszaniu (5 min)
Następnie schładzamy do 4-5 C

Schłodzone próbki powinny być wysiane
w ciągu 24-48 h
Jak później to zamrozić (długotrwale w –
20 C)
Zamrażanie i rzmrażanie zwiększa
wykrywalność Str. Agalactiae i Staph.
aureus

ZASADY PBIERANIA PRÓBEK

BactoScan

BactoScan

Podział drobnoustrojów wywołujących

Podział drobnoustrojów wywołujących

mastitis

mastitis

wg. stopnia patogenności

wg. stopnia patogenności

MAJOR PATHOGENS

MAJOR PATHOGENS

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus

Streptococcus

Streptococcus

agalactiae

agalactiae

Str uberis

Str uberis

Streptococcus

Streptococcus

dysgalactiae

dysgalactiae

Escherichia coli

Escherichia coli

Arcanobacterium

Arcanobacterium

pyogenes

pyogenes

MINOR

MINOR

PATHOGENS

PATHOGENS

CNS- Staphylococci

CNS- Staphylococci

coagulase negative

coagulase negative

Corynebacterium

Corynebacterium

bovis

bovis

Micrococcus spp.

Micrococcus spp.

Grzyby

Grzyby

drożdżopodobne

drożdżopodobne

Inny podział:

Czynniki zakaźne



S. Aureus, S. Agalactiae, S.
Dysgalactiae, Mycoplasma bovis,
Corynebacterium bovis,
Arcanobacterium pyogenes

Czynniki środowiskowe



Str. uberis E. coli

Ziarniaki gram-dodatnie, katalazo-

dodatnie

Zaliczamy:gronk. Koagulazo + i – oraz

mikrokoki
Najbardziej patogenne są gronkowce

koagulazo dodatnie:Staph. aureus,

intermedius
Wytwarzają one beta hemolizyny,

nukleazy –indykatory patogenności
Staph.aureus –wewnatrzkomórkowo,

pojawia się w mleku nieregularnie
Badanie pojedynczej próbki-rozpoznanie

tylko 75% inf. S.a./

wykrywalnosc zwiększa powtórne

badanie, lub za/rozmrażanie>>rozpad leukocytói uwolnienie

bakterii/

Gronkowce izolowane z

Gronkowce izolowane z

gruczołu mlekowego krów

gruczołu mlekowego krów

(Watts 1988)

(Watts 1988)

Klasyfikacja obecna

Klasyfikacja obecna

S. aureus

S. aureus

S. intermedius

S. intermedius

S. epidermidis

S. epidermidis

S. hyicus

S. hyicus

S. chromogenes

S. chromogenes

S. simulans

S. simulans

S. haemoliticus

S. haemoliticus

S. hominis

S. hominis

S. warneri

S. warneri

S. capitis

S. capitis

S. saphrophyticus

S. saphrophyticus

S. xylosus

S. xylosus

S. sciuri

S. sciuri

S. cohnii

S. cohnii

Klasyfikacja poprzednia

Klasyfikacja poprzednia

S. aureus

S. aureus

S. aureus

S. aureus

S. epidermidis

S. epidermidis

S. epidermidis

S. epidermidis

S. epidermidis

S. epidermidis

S. epidermidis

S. epidermidis

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Micrococcus sp.

Gronkowce powodujące

Gronkowce powodujące

mastitis

mastitis

STAPHYLOCOCCUS AUREUS

STAPHYLOCOCCUS AUREUS

STAPHYLOCOCCUS

STAPHYLOCOCCUS

EPIDERMIDIS

EPIDERMIDIS

MICROCOCCUS

MICROCOCCUS

Ziarniaki gram-dodatnie ,

katalazo-ujemne

Streptococcus /agalaciae,
dysgalactiae,uberis (parauberis)/
Enterococcus, Lactococcus,
Aerococcus

Paciorkowce izolowane z gruczołu

Paciorkowce izolowane z gruczołu

mlekowego krów (Watts 1988)

mlekowego krów (Watts 1988)

Klasyfikacja

Klasyfikacja

obecna

obecna

S. pyogenes

S. pyogenes

S. agalactiae

S. agalactiae

S. dysgalactiae

S. dysgalactiae

S. equi

S. equi

S. zooepidemicus

S. zooepidemicus

Enterococcus

Enterococcus

faecalis

faecalis

E. faecium

E. faecium

E. durans

E. durans

S. equinus

S. equinus

S. saccharoliticus

S. saccharoliticus

S. uberis

S. uberis

S. canis

S. canis

Lactococcus lactis

Lactococcus lactis

L. garvieae

L. garvieae

Klasyfikacja poprzednia

Klasyfikacja poprzednia

S. pyogenes

S. pyogenes

S. agalactiae

S. agalactiae

S. dysgalactiae

S. dysgalactiae

S. equisimilis

S. equisimilis

S. equi

S. equi

S. zooepidemicus

S. zooepidemicus

S. faecalis

S. faecalis

S. faecium

S. faecium

S. durans

S. durans

S. equinus

S. equinus

S. bovis

S. bovis

S. bovis

S. bovis

S. uberis

S. uberis

S. lactis

S. lactis

Paciorkowce powodujące

Paciorkowce powodujące

mastitis

mastitis

STREPTOCOCCUS AGALACTIAE-

STREPTOCOCCUS AGALACTIAE-

Paciorkowiec bezmleczności

Paciorkowiec bezmleczności

STREPTOCOCCUS DYSGALACTIAE-

STREPTOCOCCUS DYSGALACTIAE-

Paciorkowiec zaburzeń laktacyjnych

Paciorkowiec zaburzeń laktacyjnych

STREPTOCOCCUS UBERIS-

STREPTOCOCCUS UBERIS-

Paciorkowiec wymieniowy

Paciorkowiec wymieniowy

TEST CAMP

TEST CAMP

Str. agalactiae ma zdolność dopełniania

Str. agalactiae ma zdolność dopełniania

częściowej hemolizy w obecności

częściowej hemolizy w obecności

β

β

-toksyny

-toksyny

gronkowcowej z podłoża.

gronkowcowej z podłoża.

95-97 % szczepów Str. agalactiae daje

95-97 % szczepów Str. agalactiae daje

CAMP+, ale…

CAMP+, ale…

Nawet do 20% szczepów Str. uberis też może

Nawet do 20% szczepów Str. uberis też może

dawać CAMP+

dawać CAMP+

Do rozróżnienia tych szczepów wykorzystuje

Do rozróżnienia tych szczepów wykorzystuje

się test z eskuliną znajdującą się w tym

się test z eskuliną znajdującą się w tym

samym podłożu-rozkład

samym podłożu-rozkład

eskulity>>>zbrązowienie podłoża wokół

eskulity>>>zbrązowienie podłoża wokół

kolonii

kolonii

Charakterystyczne cechy

Charakterystyczne cechy

paciorkowców wywołujących

paciorkowców wywołujących

mastitis

mastitis

Drobn

Drobn

o-

o-

ustrój

ustrój

Sero-

Sero-

grupa

grupa

Hemo-

Hemo-

liza

liza

CAMP-

CAMP-

test

test

Eskuli-

Eskuli-

na

na

Barwa

Barwa

kolonii

kolonii

Hippu-

Hippu-

ran

ran

sodu

sodu

Str.

Str.

agal.

agal.

B

B

αβ

αβ





+

+

-

-

Niebie-

Niebie-

ska

ska

+

+

Str.

Str.

dysg

dysg

.

.

C

C

α

α





-

-

-

-

szaro-

szaro-

zielonk.

zielonk.

-

-

Str.

Str.

uberis

uberis

EF

EF

α

α





-

-

+

+

brązow

brązow

a

a

+

+

Pałeczki gram-ujemne

Enterobactteriaceae, Vibrionaceae,

pasterellaceae
Pseudomonas aeruginosa>>podkliniczne,

ostrae i przewlekłe występuja razem. Okresowe

przechodzenie podklinicznych w

ostre<<<zwązane jest to z cyklicznym rzwojem

drobnoustroju w wymieniu
„Coliformy” >>>>>ostre i nadostre mastitis w

stadach o niskiej I.K.S.

Escherichia coli Kllebsiella pneumoniae, Proteus

Pałeczki Gram- ujemne

Pałeczki Gram- ujemne

Escherichia coli

Escherichia coli

Klebsiella spp.

Klebsiella spp.

Enterobacter spp.

Enterobacter spp.

Serratia spp.

Serratia spp.

Proteus spp.

Proteus spp.

Pseudomonas spp.

Pseudomonas spp.

Pasteurella spp.

Pasteurella spp.

Paleczki gra-dodatnie

Arcanobacterium pyogenes( actinomyces
p. , corynebacterium p.)

Ropno-wrzodziejące zapalenie wymienia

Corynebacterium bovis

Corynebacterium bovis

Corynebacterium ulcerans

Corynebacterium ulcerans

Nokardie (gram +)

Żyje w glebie i zbiornikach wodnych
Do zakażeń dochodzi zwykle poprzez
kontaminacje ran lub niehigieniczne
wprowadzanie antybiotyków
dowymieniowo
Po 96 h inkubacji na agarze krwistym –
wzrost białych/pomarańczowych
pudrowatych kolonii (jak bawełna)
UWAGA!!!! MOŻLIWOŚC ZAKAŻENIA
CZłOWIEKA (zaklejać próbki taśmą)

Mykoplazmy

Stanowią istotną przyczynę części

tzw.aseptycznych zapaleń
Zwykle M. bovis lub bovigenitalium
Trwale, istotnie ograniczaja

wydzielniczość, powodują zmianę barwy i

konsystencji mleka choroby cieląt oraz:



Poronienia, zap. napletka, stawów, uszu i płuc

Enzootia
Duży obrzęk, stwardnienie ale

stosunkowo mała bolesność+ wycieki z

nosa i oczu, przedwczesne porody
Zwykle oporne na antybiotyki

(oksytetracyklina,

kolistyna –duże dawki czasempomagały)

Mykoplazmy

Pobieranie próbek –ASEPTYKA-kontaminacja

może uniemożliwić wyizolowanie M.
Niezwłocznie szybki transport ( w lecie

próbki zamrozić na czas transportu), M.

łatwo obumierają
Pożywki:zmodyfikowan podł. Edwardsa,

Goodwina, Hayflicka
Płytki inkubujemy w komorze wilgotnej w

obecności 10 %CO2, 37 C. Odczyty 3,5,7 i

10 dzień-jakwtedy brak>>>wynik ujemny
Wyniki bad. Bakt. Powinnybyc potwierdzone

czułymi metodami serologicznymi

Grzyby i drożdże

Łagodne podkliniczne
Odsetek rośnie (?)
Urazy (nieprawidłowy dój),
zanieczyszczenie tubostrzykawek
(+długotrwała antybiotykoterapia)
Izolujemy na Sabouraud, podł. Difco
Na agarze z krwią w 37 C po 24-48 h
podobne do gronkowcow wypukłe biale
kolonie (Candida, Cryptococcus)
Przy podejrzeniu –badamy mleko
podojowe lub resztkowe

Drożdżaki i grzyby

Drożdżaki i grzyby

Candida- Candida albicans

Candida- Candida albicans

Cryptococcus

Cryptococcus

Trichosporon

Trichosporon

Geotrichum

Geotrichum

Streptococcus
agalactiae

Infected cows

Infected quarter and
udder only

Using same rag for
cleaning udders

Mild fever for about 24
hours

Wash udders after
milking, reduces
problem by 50%

Staphylococcus aureus

Infected cows

On abnormal udder and
teat, milkers, vagina,
tonsils

Transmitted by hands or
rags, enters during
milking

Often quite acute for a
few days after calving.
May be fatal. Quarter
swells and turns purple.
Quickly affects entire
system. In chronic state,
udder hardens, aqueous
secretion, eventual
atrophy of the quarter.
Intermediate form with
granular secretion. Milk
hotter than normal.

Cull infected cows

Streptococcus
dysgalactiae

Infected cows

Infected quarter, injuries  

Pronounced swelling of
one or more quarters.
Milk highly abnormal.
High fever in serious
cases.Pronounced
swelling of one or more
quarters. Milk highly
abnormal. High fever in
serious cases.

 

Streptococcus uberis

Contaminated
environment

On cow's skin, mouth,
ground

Neglected udder
washing, insufficient
drying, lack of bedding,
muddy yards

Pronounced swelling of
one or more quarters.
Milk highly abnormal.
High fever in serious
cases. Affects mostly dry
cows and heifers.

Wash udders only, dry
well with disposable
paper towels for each
cow.

Escherischia coli

Contaminated
environment

Ground, bedding
(sawdust and shavings),
manure, water

Dirty calving stall, lack of
bedding, inadequate
udder washing

Often very serious. May
lead to loss of quarter or
even death. Thin yellow
secretions, with granular
texture resembling bran.
Often high fever.

 

Corynebacterium
pyogenes

Certain insects

Humid valleys, wooded
areas

 

Pronounced systematic
reaction due to toxins
caused by bacteria. Often
more than one quarter
affected. They become
hard, produce thick
smelly secretion like
cheese and difficult to
eliminate. Followed by
abscess that bursts,
releasing creamy pus,
and tissue loss.

 

Dziękuję za uwagę

Dziękuję za uwagę