Mechanizmy naprawy
DNA.
(Genetyka molekularna, red. P. Węgleński, PWN)
Głównym uszkodzeniem DNA w wyniku
działania
UV
jest
powstawanie
fotodimerów pirymidyn (np. dimery
tymidynowe, dimery tyminy z cytozyną).
W efekcie w łańcuchu DNA powstają
pary
sąsiadujących
pirymidyn
powiązane wiązaniami kowalencyjnymi.
Dimery
pirymidynowe
w
procesie
replikacji
zatrzymują
włączanie
nukleotydów przez polimerazę DNA III
do nowo syntetyzowanego łańcucha
DNA, co powoduje fragmentację DNA i
efekt letalny.
Znane są 2 podstawowe procesy naprawy
uszkodzeń
wywołanych
przez
UV:
fotoreaktywacja
i
naprawa
przez
wycinanie.
Fotoreaktywacja.
Cyklobutanolowe dimery pirymidynowe
mogą ulegać ponownej monomeryzacji
pod
wpływem
enzymów
fotoreaktywujących
(=fotoliazy)
w
obecności światła widzialnego.
Fotoliazy mają grupy prostetyczne, które
absorbują światło niebieskie i przenoszą
energię na pierścień cyklobutanowy, który
ulega następnie rozszczepieniu.
Fotoliaza E. coli ma 2 chromofory,
N5,N10-metylenotetrahydrofolian
i
zredukowany
dinukleotyd
flawinoadeninowy (FADH).
Fotoreaktywacja
jest
swoista
dla
dimerów pirymidynowych.
Stanowi ona przykład bezpośredniego
usuwania uszkodzenia i jest wolna od
błędów.
Naprawa przez wycinanie (E. coli).
Prowadzi do usuwania dimerów z DNA.
Nie wymaga światła widzialnego.
W
procesie
uczestniczą
4
białka
enzymatyczne kodowane przez geny
uvrA, uvrB, uvrC, uvrD (uvr: geny
oporności na promieniowanie UV).
Białka te tworzą układ reperacyjny
zwany endonukleazą UV (=endonukleaza
UVRABCD).
Białko kodowane przez uvrA rozpoznaje
w
DNA
deformację
strukturalną
wywołaną obecnością dimeru.
Białka kodowane przez uvrB i uvrC
przecinają łańcuch DNA w pobliżu
dimeru, w odległości 7 nukleotydów od
strony 5’ i ok. 5 nukleotydów od strony 3’.
Białko kodowane przez uvrD (helikaza)
powoduje
rozkręcenie
odciętego
12-
nukleotydowego odcinka DNA i jego
odłączenie od łańcucha DNA.
W jednym z łańcuchów heliksu DNA
powstaje luka.
Brakujący odcinek DNA jest następnie
syntetyzowany
od
końca
5’
przez
polimerazę DNA I.
Po wypełnieniu luki następuje ligacja na
końcu 3’ z udziałem ligazy DNA I.
Układ
reperacyjny
UVRABCD
jest
specyficzny w stosunku do dimerów
pirymidynowych
powstających
pod
wpływem UV.
System
ten
prowadzi
do
pełnej
i
bezbłędnej reperacji, o ile drugi łańcuch
DNA, leżący naprzeciw powstałej luki jest
nieuszkodzony.
Naprawa przez wycinanie (2
typy):
-przez wycięcie nukleotydu (NER,
ang. nucleotide excision repair),
-przez wycięcie zasady (BER, ang.
base excision repair).
NER (wycięcie nukleotydu):
Endonukleaza rozcina precyzyjnie nić
DNA po obu stronach uszkodzenia w
miejscach odległych od uszkodzenia o
ściśle określoną liczbę zasad.
Oligonukleotyd
zawierający
uszkodzenie jest usuwany.
Tworzy się luka.
Luka jest wypełniana.
System SOS naprawy DNA (u
Escherichia coli)
(Genetyka molekularna, red. P. Węgleński, PWN)
Indukcja systemu SOS następuje w
sytuacji krytycznej, kiedy pod wpływem
mutagenu
powstaną
bardzo
liczne
uszkodzenia DNA, których nie są w stanie
całkowicie
wyeliminować
systemy
reperacyjne.
Indukcja obejmuje kilkanaście różnych
genów uczestniczących w rekombinacji i
reperacji DNA.
Indukowany jest m. in. gen recA.
Gen LexA koduje białko represorowe,
które hamuje produkcję represora LexA,
białka RecA i kilkunastu innych białek
związanych z rekombinacją i reperacją
DNA.
Mechanizm:
wiązanie
się
z
określoną
sekwencją
sygnałową
w
obszarach
promotorowych
genów
kodujących w/w białka.
Indukcja wynika z inaktywacji represora
LexA
na
skutek
proteolitycznego
przecięcia tego polipeptydu.
Przecięcia dokonuje kompleks białka
RecA z jednoniciowymi fragmentami DNA
(kompleks
powstaje
w
momencie
zahamowania
replikacji
DNA
i
rozpoczynającej się degradacji DNA).
Na skutek proteolizy represora następuje
derepresja genu RecA i gwałtowny wzrost
ilości białka RecA w komórce.
Indukowana
jest
również
ekspresja
innych genów reprymowanych przez
represor LexA (np. geny uvrA, uvrB,
uvrC, uvrD, umuC, umuD).
Reakcja
SOS
zwiększa
istotnie
przeżywalność komórek po działaniu
mutagenu
w
wyniku
wzmożonej
rekombinacji, a także wypełniania luk
występujących w DNA (mimo braku nie
uszkodzonej matrycy).
Taki proces reperacji DNA powoduje
istotny wzrost częstości mutacji w
wyniku losowego włączania zasad i
kontynuacji syntezy DNA mimo braku
właściwej matrycy.
System reperacji SOS został dotąd
opisany tylko u bakterii.
Odpowiedź SOS
(Genomy, T.A. Brown, PWN)
Odpowiedź SOS umożliwia komórce
replikację DNA niezależnie od tego, że
łańcuch
polinukleotydowy
będący
matrycą zawiera miejsca AP lub dimery
cyklobutylowe i inne fotoprodukty, które
normalnie blokują lub przynajmniej
opóźniają kompleks replikacyjny.
Wymaga to utworzenia mutasomu, w
którego skład wchodzi kilka kopii białka
RecA oraz kompleksu UmuD’
2
C, który
jest trimerem utworzonym przez 2
białka UmuD’ i jedno UmuC.
Białko RecA pokrywa DNA w obszarze
sąsiadującym z miejscem uszkodzenia, a
kompleksy
UmuD’2C
wiążą
się
z
przyłączonymi białkami RecA.
Umożliwia
to
polimerazie
DNA
III
przejście przez miejsce uszkodzenia i
kontynuację replikacji DNA.
Polimeraza
napotykając
uszkodzoną
pozycję matrycy DNA wybiera nukleotyd
mniej więcej losowo, wykazując jednak
pewną
tendencję
do
wstawienia
A
naprzeciwko miejsca AP: częstość błędów
wzrasta.
Istnieją sugestie, że ta zwiększona
częstość mutacji stanowi cel SOS,
jeśli z jakichś powodów mutacje
stanowiłyby korzystną odpowiedź na
uszkodzenia DNA.
(Genetyka molekularna, red. P. Węgleński, PWN)
Rekombinacja
ogólna
(=homologiczna)
:
może zachodzić w dowolnym miejscu
między dwiema cząsteczkami DNA o
homologicznych
sekwencjach
nukleotydowych.
Rekombinacja zlokalizowana
:
szczególny
przypadek
rekombinacji;
biorą w niej udział cząsteczki o różnych
sekwencjach nukleotydowych, mające
jedynie
niewielkie
odcinki
homologiczne, między którymi zachodzi
rekombinacja.
Transpozycja.
U wielu różnych organizmów wykryto
występowanie elementów genetycznych
zdolnych do zmiany miejsca położenia w
genomie: transpozonów.
Transpozony: odcinki DNA złożone z
setek czy tysięcy par nukleotydów, które
ulegają
przemieszczaniu
się,
czyli
transpozycji.
Proces transpozycji może spowodować
duże zmiany w strukturze genomów, np.
inwersje, delecje, duplikacje dużych
fragmentów DNA.
Proces
transpozycji
związany
z
wycinaniem i integracją transpozonów
jest
wynikiem
rekombinacji
między
niehomologicznymi
sekwencjami
występującymi
w
transpozonach
i
miejscach ich integracji w DNA. Taka
rekombinacja
to
rekombinacja
nieuprawniona
.
W komórkach transpozony jednego typu
mogą występować w różnej liczbie kopii –
od kilku do kilkunastu.
Między homologicznymi sekwencjami tych
samych transpozonów znajdujących się w
genomie w różnych położeniach mogą
zachodzić
rekombinacje
homologiczne
typu
crossing-over
(prowadzą
do
znacznych
zmian
w
strukturze genomu).
Tytuł:
Naprawa DNA
przez wycinanie zasad
Autorzy:
Tomasz Śliwiński, Janusz Błasiak
Katedra Genetyki Molekularnej,
Uniwersytet Łódzki
Postępy Biochemii
Rok: 2005, Tom: 51,
Numer 2, str. 120-129.
Uszkodzenia zasad w DNA powstające w
wyniku procesów deaminacji, utleniania
czy alkilacji są naprawiane przede
wszystkim przez system naprawy DNA
przez wycinanie zasad (BER, ang. Base
Excision Repair).
Enzymami zapoczątkowującymi naprawę
DNA przez BER są glikozylazy DNA.
Glikozylazy
rozpoznają
uszkodzone
zasady i usuwają je z DNA poprzez
hydrolizę
wiązań
N-glikozydowych
pomiędzy uszkodzoną zasadą a resztą
cukrową.
Poznano i scharakteryzowano wiele
różnych glikozylaz DNA z różnych
organizmów
(człowieka,
E.
coli,
wirusowe)
o
odmiennych
specyficznościach substratowych.
Niektóre z glikozylaz DNA posiadają
dodatkowo
aktywność
liazy
AP,
powodującej
na
hydrolizę
wiązania
fosfodiestrowego pomiędzy nukleotydem
po stronie 3’ uszkodzenia a deoksyrybozą
pozbawioną zasady azotowej.
BER składa się z dwóch różnych szlaków
naprawy
DNA
(podstawowego
i
alternatywnego),
w
których
zostają
wprowadzone odpowiednio jeden, bądź od
dwóch do sześciu, nukleotydów w DNA, w
miejsce
usuniętego
wcześniej
uszkodzonego pojedynczego nukleotydu.
Dla
prawidłowego
funkcjonowania
całego organizmu i zdolności jego
przeżycia
niezmiernie
ważne
jest
kontrolowanie przez BER stabilności i
integralności genomowej komórek oraz
zapobieganie rozwojowi nowotworów
(lub innych schorzeń).
SUBSTRATY DNA DLA
BIAŁEK SYSTEMU NAPRAWY
USZKODZEŃ DNA PRZEZ
WYCINANIE ZASAD