ANDROGEN
EZA
ang. androgenesis
ANDRO + GENEZA
• Andro- <gr. andros= mężczyzna>,
pierwszy człon wyrazów złożonych,
wskazuje na związek z
mężczyzną/męskością, tego co
oznacza człon drugi.
• Geneza <gr. genesis>, zespół
warunków i przyczyn, które się
złożyły na powstanie i rozwój czegoś
= ANDROGENEZA
czyli:
• proces rozwoju nowej rośliny z
gametofitu męskiego(ziarna pyłku)
• w warunkach kultury in vitro
• uzyskuje się w ten sposób rośliny
haploidalne(posiadające gametyczną
liczbę chromosomów- n)
Ziarna pyłku różnych roślin w powiększeniu mikroskopem
elektronowym
Zarys historyczny
Proces indukowanej androgenezy został
opisany po raz pierwszy w kulturze in vitro
pylników Datura inoxia w 1966r.
W rok później u Nicotiana tabacum
W 1970 u Brassica
Obecnie androgeneza jest najbardziej
rozpowszechnioną metodą dzięki
której otrzymano haploidy u ok. 240
gatunków( rodziny Solanaceae,
Gramineae i Cruciferae)
Nicotiana tabacum=
Tytoń szlachetny
Datura inoxia=
Bieluń indyjski
W Polsce
pierwszy
mi
roślinam
i w
kulturac
h
pylników
była
Atropa
belladon
na
Proces androgenezy można
uzyskać poprzez
:
kultury in vitro
całych pylników
kultury izolowanych
mikrospor
Kultury
pylników
Kultury izolowanych
mikrospor
Bezpośrednia
Pośrednia
Czynniki, decydujące o
pozytywnych efektach
androgenezy:
• Genotyp dawcy pylników(rośliny
matecznej)
• Stadium rozwoju pyłku(mikrospory)
• Warunki kultury in vitro(fizyczne i
chemiczne)
• Warunki wzrostu roślin donorowych
Genotyp dawcy pylników(rośliny
matecznej)
Genotyp rośliny dawcy jest jednym z
najważniejszych czynników wpływających na
efektywność androgenezy.
Zdolność do androgenezy uwarunkowana jest
genetycznie.
Stąd też plon uzyskanych zarodków jest bardzo
różny dla różnych gatunków a nawet odmian.
W zależności od tego jaki genotyp posiada
roślina mateczna, efektywność procesu
androgenezy może być większa, lub mniejsza
Stadium rozwoju
pyłku(mikrospory)
Stadium rozwojowe mikrospor w pylnikach
poddanych kulturze jest czynnikiem
decydującym o powodzeniu indukcji
zarodków.
Dla większości
gatunków jest to
stadium jedno-
lub wczesno-
dwujądrowe
Schemat
• Po kilku dniach hodowli mikrospor na
pożywce następuje zmiana kierunku
rozwoju z gametofitycznego na
sporofityczny, a pierwszym krokiem
tego procesu jest anormalny-
symetryczny podział jądra, w
przeciwieństwie do typowego
podziału asymetrycznego
Warunki kultury in
vitro(fizyczne i chemiczne)
• W celu stymulacji androgenezy stosuje się
różnego typu zabieg zwiększające
efektywność tego procesu. Wyniki
wykazują że szok termiczny, któremu
poddane są pylniki, znacznie zwiększa
plon androgenicznych zarodków.
• Dobór pożywki indukującej androgenezę
jest również ważnym czynnikiem
wpływającym na efektywność
androgenezy.
• Do najczęściej stosowanych
pożywek należą:
» MS (Murashiga i Skooga)
» NN (Nitscha i Nitscha)
» B5 wg Gamborga
• Modyfikacje tych pożywek
związane z indywidualnymi
wymaganiami genotypów
dotyczą przede wszystkim
zawartości regulatorów wzrostu
oraz stężenia cukru
Czynniki fizyczne kultur in
vitro
• Czynniki fizyczne uwzględnione w procesie
androgenezy to:
* temperatura(z reguły 24-25 °C, zapoczątkowanie
procesu wymaga szoku termicznego)
*światło(w początkowych etapach ciemność lub
światło rozproszone, gdy zapoczątkowany zostanie
rozwój zarodków lub kalusa eksponuje się na światło)
* pH( 5,5-5,8 zwykle odczyn kwaśny)
*pojemność naczyń( ilość powietrza nie może być
zbyt mała lub zbyt duża)
Czynniki chemiczne kultur in
vitro
• Czynniki chemiczne uwzględnione w procesie
androgenezy to:
* cukry( sacharoza- zwykle w stężeniu 2-4%,
czasami maltoza)
*substancje wzrostowe(auksyny i cytokininy- z
reguły są one niezbędne w początkowych fazach
kultury. Najczęściej stosuje się 2,4-D i kinetynę)
*etylen(może działać jako aktywator lub
inhibitor androgenezy)
Warunki wzrostu roślin
donorowych
• Warunki wzrostu rośłin- dawców
pylników to ważny czynnik wpływający
na proces androgenezy
Wyższy plon zarodków można otrzymać
z rośłin rosnącyhc w ściśle
kontrolowanych warunkach.
A także gdy pąki kwiatowe były
pobierane z kwiatostanów w
początkowym okresie kwitnienia.
Miernik efektywności kultury
pylników i mikrospor
Efektywność kultury pylników lub
izolowanych mikrospor mierzy się za
pomocą ustalonych wskaźników.
E=R/T(100%)
Gdzie:
E- efektywność kultury
R- liczba reagujących eksplantatów
T- ogólna liczba eksplantatów