UNIWERSYTET PRZYRODNICZY
Wydział Medycyny Weterynaryjnej
KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZ
T
Zakład Biochemii
20-033 Lublin, ul. Akademicka 12
tel. [phone]
Skład aminokwasowy białek
Zadania 1-5 wykonać, stosując roztwór białka jaja kurzego,
\
elatyny i peptonu (produkt częściowego trawienia białka przez pepsynę,
zawierający polipeptydy o masie 600-3000 Da).
Zapisać wszystkie wyniki w tabeli poni\
ej, oznaczając wynik
dodatni (+) i ujemny (-).
Białko
Próba
jaja kurzego \
elatyna pepton
Biuretowa
Ksantoproteinowa
Millona
Adamkiewicza  Hopkinsa
Cysteinowa
Zadanie 1. Próba biuretowa
Celem zadania jest wykazanie obecności białka w roztworze na
podstawie reakcji barwnej powstającej na skutek połączenia jonów miedzi
z wiązaniem peptydowym.
Wykonanie. Do 1 cm3 1% roztworu białka dodać 4 cm3 odczynnika
miedziowego.
O obecności białka świadczy pojawiające się fioletowe lub ró\
owe
zabarwienie.
Zadanie 2. Próba ksantoproteinowa
Celem zadania jest wykazanie obecności aminokwasów aromatycznych w
badanym roztworze na podstawie reakcji barwnej, której produktami są
nitrowe pochodne pierścieni benzenowych zawartych w aminokwasach
aromatycznych.
Wykonanie. Do 1 cm3 1% roztworu białka dodać ok. 1 cm3 stę\
. HNO3 i
ogrzewać mieszaninę przez 30 sekund. Osad strącającego się białka barwi
się na \
ółto.
09-02-17 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 2.17.02.09
- 1 z 3 -
UNIWERSYTET PRZYRODNICZY
Wydział Medycyny Weterynaryjnej
KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZ
T
Zakład Biochemii
20-033 Lublin, ul. Akademicka 12
tel. [phone]
Zadanie 3. Próba Millona
Celem zadania jest wykazanie obecności tyrozyny w badanym
roztworze na podstawie reakcji barwnej, której produktami są rtęciowe
pochodne nitrowanej tyrozyny.
Wykonanie. Do 1 cm3 1% roztworu białka dodać kilka kropel
odczynnika Millona i otrzymaną mieszaninę ostro\
nie ogrzać nad
palnikiem. Białka z kwasem azotowym tworzą nierozpuszczalny osad, który
w czasie ogrzewania czerwienieje. Jeśli nie powstaje czerwona barwa,
dodać jeszcze kilka kropel odczynnika i ponownie podgrzać.
Uwaga! Przy nadmiarze odczynnika barwa znika podczas ogrzewania.
Zadanie 4. Próba Adamkiewicza  Hopkinsa
Celem zadania jest wykazanie obecności tryptofanu w badanym
roztworze na podstawie barwy produktów kondensacji pierścienia
indolowego tryptofanu z kwasem glioksalowym.
Wykonanie. Do 1 cm3 1% roztworu białka dodać 1 cm3 stę\
onego
CH3COOH. Roztwór zmieszać i delikatnie podwarstwić 1 cm3 stę\
onego
H2SO4, wlewanego po ściance probówki. Na pograniczu obu warstw powstaje
fiołkowy krą\
ek.
Zadanie 5. Próba cysteinowa
Celem zadania jest wykazanie obecności cysteiny w badanym
roztworze na podstawie powstającego siarkowodoru i siarczku ołowiu.
Wykonanie. Do 1 cm3 1% roztworu białka dodać 1 cm3 20% NaOH i parę
kropli 2 mol/dm3 octanu ołowiu (II), podgrzać. Płyn ciemnieje.
Mieszaninę oziębić i dodać do niej ostro\
nie kroplami stę\
ony HCl.
Wydziela się siarkowodór.
Z metioniny w warunkach reakcji nie powstaje siarkowodór i wynik
próby jest ujemny.
09-02-17 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 2.17.02.09
- 2 z 3 -
UNIWERSYTET PRZYRODNICZY
Wydział Medycyny Weterynaryjnej
KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZ
T
Zakład Biochemii
20-033 Lublin, ul. Akademicka 12
tel. [phone]
Zadanie 6. Ilościowe oznaczanie białka metodą biuretową
Przygotowanie krzywej wzorcowej. Przygotować ró\
ne rozcieńczenia
wzorcowego roztworu białka zgodnie z danymi w tabeli.
Nr Kazeina Woda
Stę\
enie Absorbancja
probówki (1 mg/cm3) Destylowana
1 1,0 cm3 - 1%
2 0,8 cm3 0,2 cm3 0,8%
3 0,6 cm3 0,4 cm3 0,6%
4 0,4 cm3 0,6 cm3 0,4%
5 0,2 cm3 0,8 cm3 0,2%
Do ka\
dej probówki dodać po 4 cm3 odczynnika miedziowego i
pozostawić w temperaturze pokojowej na 20-25 min. Potem mierzyć
absorbancję wobec próby odczynnikowej (1 cm3 wody destylowanej i 4 cm3
odczynnika miedziowego) przy długości fali 545 min.
Wykreślić krzywą zale\
ności stę\
enia kazeiny od wartości
absorbancji.
Uwaga! Proszę przynieść krzywą kalibracyjną na następne zajęcia!!!
09-02-17 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 2.17.02.09
- 3 z 3 -