plik


ÿþUNIWERSYTET PRZYRODNICZY WydziaB Medycyny Weterynaryjnej KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZT ZakBad Biochemii 20-033 Lublin, ul. Akademicka 12 tel. 081 445 69 73 WBa[ciwo[ci fizykochemiczne biaBek Zadanie 1. Oznaczanie punktu izoelektrycznego biaBka Celem zadania jest oznaczenie punktu izoelektrycznego kazeiny na podstawie jej zachowania w roztworach o ró\nym pH. Wykonanie. Do 6 probówek odmierzy podane w tabeli objto[ci mianowanych roztworów CH3COOH i wody destylowanej, tworzc tym samym ró\ne [rodowiska reakcji. Nastpnie do ka\dej probówki dodawa kroplami po 1 cm3 0,5% roztwór kazeiny w 0,1 mol/dm3 CH3COONa. Po dodaniu ka\dej kropli wstrzsn probówk. Odstawi zawarto[ probówek na 30 min i po tym czasie zaobserwowa zmiany zmtnienia roztworów. Wyniki zanotowa w tabeli: brak zmtnienia (-) lub ró\ne stopnie zmtnienia (+,++,+++). Obliczy pH w ka\dej probówce, posBugujc si równaniem Hendersona  Hasselbalcha. W jakim pH zmtnienie jest najwiksze? Ile wynosi warto[ punktu izoelektrycznego dla kazeiny? Nr probówki SkBadnik, cm3 1 2 3 4 5 6 0,01 mol/dm3 CH3COOH 0,6 1,3 - - - - 0,1 mol/dm3 CH3COOH - - 0,3 1 8 - 1 mol/dm3 CH3COOH - - - - - 1,6 H2O 8,4 7,7 8,7 8 1 7,4 0,5% kazeina 1 1 1 1 1 1 Zmtnienie pH Zadanie 2. Wysalanie albumin i globulin Celem zadania jest rozdzielenie mieszaniny biaBek surowicy poprzez proces wysalania, który wykorzystuje wBa[ciwo[ci chemiczne poszczególnych biaBek. Wykonanie. Do 5 cm3 surowicy doda równ objto[ nasyconego roztworu (NH4)2SO4. Po wytrceniu kBaczkowatego osadu globulin roztwór przesczy. Do supernatantu dodawa (NH4)2SO4 in substantia porcjami i miesza a\ do momentu, w którym na dnie probówki pozostan krysztaBki nierozpuszczonego (NH4)2SO4. Wytrca si wówczas osad albumin. Po odsczeniu zbada rozpuszczalno[ osadu w H2O. Przescz skontrolowa na 09-02-18 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 2.18.02.18 - 1 z 3 - UNIWERSYTET PRZYRODNICZY WydziaB Medycyny Weterynaryjnej KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZT ZakBad Biochemii 20-033 Lublin, ul. Akademicka 12 tel. 081 445 69 73 obecno[ biaBka prób strceniow z kwasem trichlorooctowym (TCA) lub sulfosalicylowym. Zadanie 3. Strcanie biaBek kwasami nieorganicznymi i organicznymi Celem zadania jest obserwacja dziaBania st\onych kwasów nieorganicznych oraz niektórych organicznych na biaBko. W reakcjach tych mo\e dochodzi do denaturacji biaBka. Wykonanie. Do 3 probówek odmierzy po 1 cm3 1% roztworu biaBka jaja. Nastpnie do 1, 2 i 3 probówki wprowadzi odpowiednio po 0,5 cm3 st\onego HCl, HNO3, i H2SO4. Zawarto[ ka\dej probówki wstrzsn. W probówce z HCl i H2SO4 osad zdenaturowanego biaBka rozpuszcza si (sole biaBek z tymi kwasami silnie dysocjuj). Natomiast w probówce z HNO3 osad nie znika po wstrz[niciu. Do 2 innych probówek odmierzy po 2 cm3 1% roztworu biaBka jaja. Nastpnie do 1 probówki wprowadzi kroplami 5% roztwór kwasu TCA, a do 2 probówki  20% roztwór kwasu sulfosalicylowego. Wytrca si biaBy osad. Kwas sulfosalicylowy i TCA tworz z biaBkami sole nierozpuszczalne i dlatego s stosowane do odbiaBczania pBynów biologicznych. Zwizki te w wikszych st\eniach wywoBuj denaturacj biaBka. Zadanie 4. Strcanie biaBek kationami metali ci\kich Celem zadania jest obserwacja dziaBania soli metali ci\kich (Cu, Hg, Pb) na biaBko w zale\no[ci od pH. Do 3 probówek odmierzy po 2 cm3 1% roztworu biaBka o pH = 3 i do 3 kolejnych tego samego biaBka o pH = 8. Nastpnie do ka\dej z probówek kolejno dodawa wymienione w tabeli odczynniki. Zanotowa powstanie (+) lub brak (-) osadu. Wyja[ni wyniki reakcji w poszczególnych probówkach, uwzgldniajc [rodowisko oraz zjonizowanie odpowiednich grup. BiaBko jaja Odczynnik pH 3 pH 8 10% CuSO4 5% HgCl2 5% (CH3COO)2Pb 09-02-18 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 2.18.02.18 - 2 z 3 - UNIWERSYTET PRZYRODNICZY WydziaB Medycyny Weterynaryjnej KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZT ZakBad Biochemii 20-033 Lublin, ul. Akademicka 12 tel. 081 445 69 73 Zadanie 5. Ilo[ciowe oznaczenia biaBka w badanej próbie Celem zadania jest ilo[ciowe oznaczenia zawarto[ci biaBka w badanej próbie metod biuretow na podstawie przygotowanej wcze[niej krzywej kalibracyjnej. Wykonanie. Odmierzy 1 cm3 otrzymanego roztworu biaBka, doda 4 cm3 odczynnika miedziowego. Po 20-25 min mierzy absorbancj przy dBugo[ci fali 545 nm. Na podstawie krzywej kalibracyjnej wyznaczy st\enie procentowe biaBka w otrzymanym roztworze. Uwaga! Wykorzysta krzyw kalibracyjn przygotowan na poprzednich wiczeniach. Absorbancja St\enie biaBka Próba przy 545 nm [%] 1 2 Zrednia - 09-02-18 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 2.18.02.18 - 3 z 3 -

Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
biochemia ćw lipidy 2 pytania kłych
biochemia I 1 cw
biochemia II 5 cw
biochemia II cw
ĆW 10 biochemia tkankowa
ĆW 10 biochemia tkankowa
MATLAB cw Skrypty
cad2 cw 5 6
cw formularz
Cw 2 zespol2 HIPS
Cw 9 Wzmacniacz mocy
Cw 1
Biochemia zwierzÄ…t skrypt UR
metrologia cw 1 protokol
Sprawozdanie Ćw 2

więcej podobnych podstron