Mateusz Stoszko
OTRZYMYWANIE PROTOPLASTÓW Z LIŚCI SAŁATY
Przebieg doświadczenia:
+ wycięto z liści sałaty fragmenty (ok. 30) o wymiarach mniej więcej 2 x 2 mm, które przeniesiono do probówki zawierającej 9.5 ml 13% r-ru sorbitolu
+ probówkę inkubowano w łaźni wodnej w temperaturze 37oC przez 5 minut, tak by fragmenty liścia sałaty wyrównały potencjał osmotyczny z r-rem sorbitolu
+ następnie do probówki dodano 0.5ml r-ru hydrolaz glikozydowych (preparat zawierający pektynazy, celulazy i inne enzymy trawiące ścianę komórkową komórki roślinnej)
+ probówkę ponownie umieszczono w łaźni wodnej, od czasu do czasu wstrząsano zawartość probówki
+ r-r z probówki przesączono przez gazę, którą przepłukano po tym 2ml 13% r-ru sorbitolu
+ przefiltrowaną zawiesinę przeniesiono do naczynek wirówkowych i odwirowano przy 5000 obrotach na minutę przez 5 minut
+ nasącz wylano, natomiast peletkę protoplastów, która zebrała się na dnie probówki zawieszono w ok.
0.1ml 21% r-ru sacharozy, który pozwolił uzyskać równowagę osmotyczną
+ przygotowano preparat mikroskopowy z tak otrzymanego r-ru protoplastów z liści sałaty, który obserwowano pod mikroskopem przy powiększeniu 40x
Obserwacje:
W polu widzenia zaobserwowano kilka protoplastów miały one kształt kulisty, ponieważ zostały pozbawione ograniczającej błonę komórkową ściany komórkowej, komórki przyjęły kształt sferyczny. We wnętrzu protoplastów widoczne były organella komórkowe (gł. chloroplasty) „zapchnięte” na obrzeża komórki, co spowodowała prawdopodobnie wodniczka wypełniającą wiekszą część komórki.