Spektrofotometria
Technika instrumentalna, w której do celów
analitycznych wykorzystuje się przejścia
energetyczne zachodzÄ…ce w czÄ…steczkach,
spowodowane absorpcjÄ… promieniowania
elektromagnetycznego w zakresie nadfioletu
(UV, 200-380 nm), widzialnym (VIS, 380-780
nm) lub bliskiej podczerwieni (0,78-30000 źm)
Metodą spektrofotometrii UV-VIS można
oznaczać substancje organiczne (np.
węglowodory aromatyczne, aldehydy, ketony i
aminy) i nieorganiczne (np. ozon, SO2),
wykazujÄ…ce absorpcjÄ™ w nadfiolecie, zwiÄ…zki
absorbujÄ…ce promieniowanie w zakresie
widzialnym, w tym barwne zwiÄ…zki organiczne
(barwniki) i barwne sole metali ( KmnO4,
CuSO4).
Analiza ilościowa metodą spektrofotometrii UV-
VIS oparta jest ta pomiarze absorbancji A
badanego roztworu przy określonej długości fali
, zgodnie z prawem Lamberta-Beera
A = µ · l · c
gdzie µ jest współczynnikiem absorpcji przy
długości fali , l grubością warstwy
absorbującej, a c stężeniem analitu w badanym
roztworze
AbsorbancjÄ™ definiuje siÄ™ jako:
A = log I0/I
gdzie I0 to natężenie promieniowanie padającego na
ośrodek absorbujący a I to natężenie promieniowania
po przejściu przez ośrodek absorbujący.
Jeżeli współczynnik absorpcji rozpuszczalnika jest
równy zeru, to absorbancja wiązki promieniowania
monochromatycznego przechodzÄ…cej przez
jednorodny roztwór jest wprost proporcjonalna do
stężenia c roztworu i grubości warstwy absorbującej
l.
" Zależność pomiędzy absorbancją a stężeniem analitu, w
warunkach gdy badany układ spełnia prawo Lamberta-
Beera ma charakter prostoliniowy i można ją wykorzystać
do wyznaczenia stężenia analitu w próbie.
" Prawo to stosuje się dla roztworów rozcieńczonych.
" Jeżeli w roztworze znajduje się więcej substancji, które
absorbują promieniowanie przy wybranej długości fali, to
absorbancja tego roztworu jest równa sumie absorbancji
jego poszczególnych składników
A = A1+A2+A3+...+An=
(µ1c1 + µ2c2 + µ3c3 + ... + µncn) · l
" Do badania absorbancji promieniowania w nadfiolecie i
zakresie widzialnym służą spektrofotometry UV-VIS.
y
ródło
Roztwór
Monochromator Detektor
Miernik
promieniowania
badany
ciągłego
Uchwyt Fotokomórka, Galwanometr
Pryzmat, siatka
Lampa
fotopowielacz, mikroprocesor
dyfrakcyjna
wolframowa, i kuweta
fotodioda
halogenowa