Mikroskopia Fluorescencyjna i
Konfokalna
[e-mail]
Zasada fluorescencji
DNA wybarwione DAPI
Historia wynalazku
" 1955r  będąc
doktorantem w Harvard
University opisał i
zbudował mikroskop
konfokalny
Marvin Minsky
ur. 09.08.1927r
Pierwszy komercyjny system
konfokalny firmy Zeiss
CLSM (Confocal laser scanning microscopy)
Nowoczesna odmiana mikroskopu świetlnego, w którym
z
ródłem światła jest laser.
Umożliwia badanie żywych komórek.
Porównanie rejestrowania promieni świetlnych w konwencjonalnym
mikroskopie optycznym i w mikroskopie konfokalnym
Ogólna charakterystyka mikroskopu konfokalnego na przykładzie LSCM (Laser
Scanning Confocal Microscope)
System skanujący mikroskopu LSCM
Mikroskop LSCM jest mikroskopem skanującym, czyli obraz nie jest zbierany z
całego preparatu na raz, ale punkt po punkcie z kolejnych linii, co uniemożlia
rejestrację obrazu za pomocą kamery lub oka. Porzebne są do tego specjanlne
detektory  fotopowielacze. Wiązką lasera, która skanuje preparat można kierować
za pomocą luster lub deflektorów akustyczno-optycznych (AOD)
Schemat przedstawiający LSCM z układem obrotowych
luster sterujących wiązką promieni laserowych.
System ten jest mniej wydajny niż AOD ponieważ pozwala
na skanowanie płaszczyzny w mniejszym tempie
Skanowanie i rekonstrukcja 3D
Utworzenie obrazu
płaszczyzny preparatu wymaga
jego przeskanowania punkt po
punkcie.
Skanowanie polega na
odchyleniu promienia lasera w
osi X i Y (układ luster
pozycjonowanych)
Obraz wielobarwny
Uzyskujemy kilka obrazów
monochromatycznych, które w
Obraz jest efektem nałożenia 3
wyniku nałożenia dają
niezależnych obrazów rejestrowanych
sumaryczny obraz wielobarwny.
w oddzielnych kanałach dla różnych
fluorochromów
Mikroskop optyczny vs. konfokalny
Porównanie obrazów z mikroskopu tradycyjnego
fluorescencyjnego i konfokalnego
Sarkomery mięśniowe u ryby z rodziny karpiowatych - Danio
pręgowany (Brachydanio rerio, ang. zebrafish)
Aparaty Golgiego (na pomarańczowo) i elementy cytoszkieletu
(na zielono) u Drosophila melanogaster podczas mitozy
Komórka nerwowa - Żaba szponiasta (Xenopus laevis )
mikrotubule cytoszkieletu (na zielono) jądro (na fioletowo).
Preparaty
3D