2011-03-21
Konserwacja nasienia w stanie płynnym
Polega na rozrzedzeniu nasienia w specjalnym płynie,
schłodzeniu do temperatury lodówki 5oC
Nasienie przeżywa 3-15 dni
Zależne od wielu czynników
Konserwacja nasienia psa
NAJCZ
STSZA PRZYCZYNA ???
i sztuczna inseminacja suki
Dr hab. Wojciech Niżaoski
Katedra Rozrodu z KlinikÄ… ZwierzÄ…t Gospodarskich
TRANSPORT!!!  POWTÓRKI OGRANICZONA DOST
PNOŚĆ
UNASIENIANIA itp SAMCA!!!
Konserwacja nasienia w stanie płynnym
Pobranie II frakcji nasienia i ocena wstępna
Rozrzedzenie nasienia w 33oC 1:1-1:3-1:5
Wolne (1-1,5 godz.) Schładzanie do 5oC termosu na
schładzanie do 5oC nasienie
Zapakowanie szczelnie zamkniętych probówek z
nasieniem w termosie z lodem i wysyłka
Najbardziej optymalne pojemniki neoporowe
Pojemnik neoporowy do transportu nasienia schłodzonego
Inseminacja nasieniem konserwowanym w stanie płynnym
Rozrzedzalniki
1. Bufor TRIS 30,28 " stopniowe ogrzanie nasienia
fruktoza 12,15 " kontrola ruchliwości plemników
r-r macierzysty
kwas cytrynowy 17,80 " przeprowadzenie inseminacji domacicznej, ewentualnie dopochwowej
aqua dest. ad 1000,0 " dogodny termin inseminacji: 2-6 dzieo cyklu rujowego
8 części r-ru macierzystego wymieszad z 2 częściami żółtka " 2-3 krotna inseminacja, co 48 godzin
2. Rozrzedzalniki firmowe np. Canine Chilled
3. Mleko poddane wysokiej pasteryzacji 92oC 8 min
Rozrzedzalniki powinny zawierad antybiotyki
penicillin 100 000 jm/100 ml
streptomycin 100 mg/100 ml
1
2011-03-21
Konserwacja nasienia w niskich temperaturach Konserwacja nasienia w niskich temperaturach
Pobranie II frakcji nasienia i ocena wstępna Rozrzedzenie
Zamrożenie do -196oC
wstępne 33oC
Przechowywanie wiele lat
30 min
Cele ???
Rozrzedzenie wyrównawcze 22oC
Zupełna niezależnośd Wymiana międzynarodowa i
czasowa pobierania i międzykontynetalna
60 min
inseminacji suki
Rozrzedzenie ostateczne 5oC. +GLICEROL!
Transport
 Zabezpieczenie na
90 min
wypadek chorób psa ekwilibracja
Banki nasienia
Mrożenie w słomkach w parach azotu -140oC
Rezerwa
genetyczna
cennych samców
Ciekły azot -196oC
Nasienie w kontenerach przebywad
może przez nieograniczony czas
Mrożenie nasienia
Rozrzedzalniki
Rozmrażanie nasienia i inseminacja
1. Bufor TRIS 30,28
" Rozmrażanie w łaz
ni wodnej
fruktoza 12,15
r-r macierzysty
" 0,5 ml słomki w 37oC przez 60 sek.
kwas cytrynowy 17,80
" 0,5 ml słomki w 70oC przez 6 sek.
aqua dest. ad 1000,0
" 0,25 ml słomki w 37oC przez 30 sek.
8 części r-ru macierzystego wymieszad z 2 częściami żółtka
" Kontrola ruchliwości plemników po rozmrożeniu (min. 40%)
" Dawka inseminacyjna 150-200 mln. plemników ruchliwych
Dodatek glicerolu: na każde 100 ml rozrzedzalnika powinno
przypadad 4-6 ml gliceryny
" Konieczna inseminacja domaciczna
" Inseminacja dzieo po dniu 2x pomiędzy 4-7 dniem cyklu rujowego
2
2011-03-21
Department and Clinic of Reproduction Date ........................... Department and Clinic of Reproduction
Faculty of Veterinary Medicine
Faculty of Veterinary Medicine
University of Environmental and Life Sciences
University of Agriculture in Wrocław Pl. Grunwaldzki 49
Pl. Grunwaldzki 49, 50 366 Wrocław 50-366 Wrocław
Poland
Poland
Phone [phone] (302)
Tel. [phone] Mobile [phone]
e mail: [e-mail] e-mail: [e-mail]
CERTIFICATE OF COLLECTION OF DOG SEMEN
Canine Semen Evaluation and Conservation Form
Name of dog: & & & & & & & & ..& & .. KC Reg No& & & & & & & & & & .
Owner .............................................................. Adress ...................................................................
Dog s Name, Reg ....................................................................................................... Breed & & & & & & & & & & & & & & ... Date of birth& & & & & & & & & ...
Breed ............................................... Color ................................ Age ............. Proven YES NO
ID& & & & & & & & & & & & & & & & .
Semen evaluation:
Veterinary certificate
Date of collection .................................
I hereby certificate that the dog described abovewas presented for semen collection on & & & & .
Volume .................................................... Color ............................ Viscosity ..................................
pH ................. Percentage of prog. motility ............ %
From the collection resulted 1. & & & & & & . 0.5 mL straws
Concentration of sperms per mL ...................... of 2nd fraction; TOTAL count of sp.......................
or 2& & & & & & & mL of fresh semen
Morphology
The semen can be identified as follows
Primary defects ................................... WBC .................................
RBC ...................................
& & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & .
Epithelial cells ....................
Colour of straws/plug & & & & & & & & & & & & & & & & ..
Other comments .................
Secondary defects ..............................
Type of extender& & & & & & & & & & & & & & & & & & &
Total abnormal ...................................
Recommended thawing procedure & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & .
Testicular and epididymal size, consistency and symmetry ........................................................
Recommended number of straws per AI & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
.......................................................................................................................................................
Semen quality (if frozen - post-thaw): Excellent Good Acceptable Sub-standard
Diagnosis ......................................................................................................................................
Preservation: Chilled semen Total number of spermatozoa & & & & & & & & & & & & . Motility & & & & & & & & ..
Extender used ..................................................................................................
Semen/Extender Ratio ..................................................................................... Number of spermatozoa per straw & & & & & & & & & & . Abnormal sperm & & & & &
Date and time of dilution .................................................................................
Motility after dilution ......................... AT THE TIME OF SEMEN COLLECTION THE SEMEN DONOR WAS CLINICALLY EXAMINED AND WAS
Motility after cooling .......................... FOUND FREE FROM SIGNS OF ANY DISEASE. HE HAS TWO NORMAL TESTICLES, FULLY DESCENDED IN
Number of spermatozoa in extended ejaculate ................................................ THE SCROTUM.
Comments (shipment conditions, insemination technique) ..........................................................
....................................................................................................................................................... Signature of veterinarian & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & .
.......................................................................................................................................................
Printed name& & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
Cryopreservation: Adress & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & .
Extender used ................................................................................................................................
Phone [phone] e-mail: [e-mail]
Packaging system ..........................................................................................................................
Motility after thawing (control sample) ........................................................................................
Declaration by stud owner
Number of sperms per one straw ..................................................................................................
I hereby certify that the above dog, from which semen has been collected, is the alleged dog, and that it rightfully belongs to me.
Shipment of cryopreserved semen:
Signature of owner& & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & .
Number of insemination doses / straws shipped ...........................................................................
Number of sperms per straw .......................................................................................................... Printed name& & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
Insemination dose  suggestions ....................................................................................................
Adress & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & .
Preferred method of thawing and insemination .............................................................................
.........................................................................................................................................................
Phone & & & & & & & & & & & & & . Fax, e-mail & & & & & & & & & & & & & & & & .
.........................................................................................................................................................
Department and Clinic of Reproduction
Faculty of Veterinary Medicine
University of Environmental and Life Sciences in Wrocław
Pl. Grunwaldzki 49, 50-366 Wrocław, Poland
Phone [phone] (302), Mobile [phone], e-mail: [e-mail]
of frozen semen
INSEMINATION SHIPMENT OF SEMEN TRANSFER OF OWNERSHIP TRANSFER STORAGE LOCATION DISCONTINUE
I CERTIFY THAT I AM THE ( ) OWNER ( ) CO-OWNE OF FROZEN SEMEN AT LABORATORY
OF DONOR (breed) & & & & & & & & & & & & & & & & .., reg no & & & & & & & & & & & & & & .
Reg name & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & .
I authorize & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
STRAW UNITS IDENTIFIED BELOW TO THE FOLLOWING
Semen ID
Date Stud ID StrawID
TO: DATE& & & & & & & ..
NAME& & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & ..
ADDRESS& & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & ...
Sztuczna inseminacja
CITY& & & & & & & & & & & .. COUNTRY & & & & & & & & & &
PHONE, E-MAIL& & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
SHIPMENT FOR INSEMINATION OF BITCH
Breed & & & & & & & & & & & reg no & & & & & & & & & & & & .
Reg name & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & ..
Owner of the bitch Co-owner Lessee of bitch
Name & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
Adress & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & ..
City & & & & & & & & & & & & Country & & & & & & & & & & &
Phone, e-mail & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
I authorize the above transaction and certify I am the legal owner of the
frozen semen of donor listed above.
Signature & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & ..
Printed name & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
Address & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
TOT City & & & & & & & & & & .. Country & & & & & & & & & & & ..
Phone, e-mail & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & ..
Shipping or transfer date& & & & & & & & & . Technician signature & & & & & & & & & & & & ..
Sztuczna inseminacja suk
Sztuczna inseminacja
suk
Awersja
Życzenie właściciela
" bezwzględnie należy ustalid optymalny termin unasienniania
Suki dominujÄ…ce
" inseminacja do 5-10 min. po pobraniu, rozmrożeniu, ogrzaniu
nasienia
Konserwacja nasienia
Nadpobudliwośd,
" przed inseminacją każdorazowo ocena wstępna nasienia
agresja
" sprzęt inseminacyjny musi byd ogrzany
" dawka inseminacyjna 150-200 mln plemników
" objętośd zwykle 1-5 ml
Wąskośd pochwy
" ruchliwośd nasienia świeżego >70%
Rasy predysponowane
" ruchliwośd nasienia konserwowanego >40%
Dysproporcja wielkości
3
2011-03-21
anoestrus proestrus estrus diestrus
7 m-cy 6-11 dni 5-9 dni 56-60 dni
owulacja
szczyt
Sztuczna inseminacja 2 (lub>) razy co 2-3 dni,
płodności
20 ng/ml
nasieniem świeżym 2-5 dni po wyrzucie LH
60-70 pg/ml
dojrzewanie
oocytów szczyt
21 dnia
" naczęściej dopochwowa
15-60ng/ml
estrogeny LH
progesteron
5-10 ng/ml
Sztuczna inseminacja Co 24 godz. od 4 do 7
2,5-5 ng/ml
8-15 pg/ml
nasieniem dnia cyklu jajnikowego
0,5 ng/ml 1-2,5 ng/ml
konserwowanym
-13 -12 -11 -10 -9 -8 -7 - 6 -5 -4 -3 -2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
tolerancja
" domaciczna
zainteresowanie psów
Indeks eozynofilny >80%
silny obrzęk zapadnięcie zapadnięcie+silne
waginoskopia
błony śluzowej ukątowania
Test progesteronowy-
Oznaczenie progesteronu
ustalenie teminu krycia
Pobranie krwi
Najkorzystniej określid  0 Wartości bezwzlędne stężeo są
Surowica (na skrzep) Osocze (EDTA)
albo
dzieo cyklu czasem mało miarodajne
ELISA
Unasiennianie nasieniem
albo
rozmrożonym 4-7 dzieo cyklu
Unasiennianie nasieniem
świeżym 2-5 dzieo cyklu
EIA lub RIA
Coat-A-Count DPC
Immulite
Elecsys
MiniVidas
Cykliczne zmiany w obrębie
Test ELISA
nabłonka pochwy właściwej
anoestrus proestrus oestrus dioestrus
C1 <1 ng/ml C1 >8 ng/ml
C2 1-2,5 ng/ml C3 2,5-8 ng/ml
17-ß-estradiol
4
2011-03-21
Nabłonek pochwy-schemat i klasyfikacja komórek Obraz cytologiczny
proestrus
kk. powierzchowne
w. powierzchowna
skeratynizowane
w. pośrednia
k. pośrednia duża
k. pośrednia mała
k. przypodstawna
w. przypodstawna
k. piankowata
k. metoestralna
estrogeny
Obraz cytologiczny Obraz cytologiczny
oestrus dioestrus
Zasada postępowania przy wyznaczaniu
Skutecznośd unasienniania
terminu unasienniania
INDEKS EOZYNOFILII >80%
Sztuczna inseminacja i Nasienie konserwowane
Pomiary Pomiary
konserwacja w stanie w niskich temperaturach
PRG PRG
płynnym 84% 67-69%
Wyznaczenie dnia
 0
Krycie naturalne 92%
Unasiennianie w terminie
U psów rasowych takie wskaz
niki płodności przestały być realne&
płodnym
5
2011-03-21
Budowa anatomiczna pochwy
Inseminacja dopochwowa
- przeprowadzana przy unasiennianiu nasieniem świeżym
- nie stosowana przy wykorzystaniu nasienia rozmrożonego
Dawka inseminacyjna
150 mln plemników o ruchu prawidłowym
w objętości 0,5-5 ml
Skutecznośd sztucznej inseminacji suk
Inseminacja dopochwowa-technika
nasieniem świeżym (n=81)
Odsetek suk Åšrednia Samice Samce Odsetek
szczennych liczebnośd szczeniąt żywo
miotu urodzonych
75,9% 6,1 2,9 3,2 88,3%
Prawidłowe wprowadzenie pipety z lateksowym
Inseminacja dopochwowa - technika
balonikiem uszczelniajÄ…cycm
(kateter Foleya lub  Osiris gun )
nasienie
nasienie
powietrze
powietrze
6
2011-03-21
Inseminacja domaciczna
Inseminacja dopochwowa - technika
sprzęt i technika
Metoda skandynawska
Metoda nowozelandzka - waginoskopowa
Laparoskopia
Laparotomia
Inseminacja domaciczna
Technika inseminacji domacicznej
Metoda skandynawska
metodÄ… norweskÄ…
Inseminacja domaciczna Inseminacja domaciczna
Metoda waginoskopowa Metoda waginoskopowa
7
2011-03-21
Skutecznośd sztucznej inseminacji suk
Metoda inseminacji poprzez
nasieniem konserwowanym w niskich temperaturach (n=12)
laparoskopiÄ™ i laparotomiÄ™
Odsetek suk Åšrednia Samice Samce Odsetek
szczennych liczebnośd szczeniąt żywo
miotu urodzonych
58,3% 5,5 2,6 2,9 100%
8