1. Dwa głowne enzymy w Met. Elisa

Peroksydaza (chrzanowa) i fosfataza alkaliczna

2. Wzór, specyficzność substratowa, poligalakturonaza

3. Pullulanaza- enzym degradujący rozgałęzienia w amylopektynie, można dzieki niej przyspieszyc proces scukrzania

pullulan-6-glukanohydrolaza; EC 3.2.1.41

Enzym ten umożliwia usunięcie rozgałęzień zarówno amylopektyny jak i amylozy. Efektem finalnym jego działania są oligo- i poli- sacharydy o stopniu polimeryzacji z zakresu 115 - 2300.

Enzym ten jest z reguły stosowany w kombinacji z innymi amylazami.

Chociaż enzym ten zidentyfikowano w takich roślinach jak: bawełna, ryż i szpinak to jednak w celach przemysłowych izoluje się go głównie ze szczepów bakterii. Pullulanaza umożliwia hydrolizę wiązań 1,6- glikozydowych jedynie gdy wiązanie to scala łańcuchy polisacharydowe połączone wiązaniem 1,4-glikozydowym.

W zależności od zdolności pollulanazy do hydrolizy wiązań glikozydowych rozróżnia się dwa typy pollulanaz: I (nieaktywne w hydrolizie wiązań 1,4-) i II (aktywne w hydrolizie wiązań 1,4-).

4. Katal- jednostka SI aktywności enzymatycznej i innych katalizatorow. Wyrazaja akt. Katalityczna. 1 katal taka ilość katalizatora która przekonwertuje 1 mol substratu w czasie 1 s w określonych warunkach reakcji; 1 kat = 1mol/s = 60*10⁶U

5. Teoria indukowanego dopasowania Koschlanda

Konformacje zmieniaja się na pasujące do siebie bezpośrednio przed polaczeniem enzymu z substratem. Z teorii wynika, że enzym pod wpływem substratu zmienia swa strukture tak, że centrum aktywne z charakterystycznymi grupami funkcyjnymi otacza substrat lub jego fragment, co umozliwia dokonanie się zalozonej reakcji, przy czym zmianie ulega tez konformacja substratu co dodatkowo ułatwia wzajemne dopasowanie

Np. działanie B-amylazy na fragment czasteczki skrobii

6. Wiązanie stabilizujące strukture wtórna białek

w. wodorowe (2*)

w.wodorowe, kowalenc. w.dwusiarczkowe, w.jonowe, oddz.van der Waalsa, oddz hydrofobowe (3*)

7) TEMED - N,N,N',N'-Tetraetylenodiamina- organiczny zw. Chemiczny z gr. Diamin o wzorze półstrulturalnym (CH3)2-N-CH2-CH2-N-(CH3)2,

Stosowany jako katalizator polimeryzacji akrylamidi (powoduje rozbicie czasteczek nadsiarczanu amonu, który daje rodniki niezbędne do polimeryzacji)

Jest tez skutecznym związkiem chelatujacym.

Białe, drobnokrystaliczne ciało stałe.

Łatwopalny, żrący

ALDEHYD GLUTAROWY (glutaral) - organiczny zw. Chemiczny z gr. Aldehydów ,

Wykorzystywany do sterylizacji jako substancja konserwujaca.

Trujacy.

Aktywny w stosunku do form wegetatywnych bakterii, wirusów i grzybów.

Nie powoduje korozji metali.

Może podrażniać skore oczy i blony sluzowe

Bezbarwna ciecz o ostrym zapachu

Toksyczny

8. Czego wynikiem jest barwa w Met. Lowryego?

Pozytywna reakcja (niebieska barwa błękitu fosfomolibdenowego) bialka, łancuchy polipept, tyrozyna, tryptofan; fenole, puryny, pirymidyny, kwas moczowy

9. Metody immobilizacji:

ZALETY: zwiększają (mogą) specyficzność enzymow, selektywność względem niektórych substratow

Fizyczne metody są łagodne, nie powoduja strat w aktywności enzymu, proste i tanie

Chemiczne zapewniaja stabilność układu

WADY: Fizyczne powoduje czeste wymywanie enzymu ze złoża

Chemiczne: Stabilnosc układu wiąze się z czesciowa utrata aktywności enzymu

10. GUMA GUAR zagęstnik, środek żelujący, WIELOCUKIER,

Reszty D-mannozy -------D-galaktozy

|

β-1,4-glikozydowe

Dodatek do żelu agarozowego poprawia jego wytrzymałość mechaniczna i bierze udzial w sieciowaniu go

11. KARAGENIAN- reszty β-D-galaktozy-------3,6-anhydro-α-D-galaktoza

|

β-1,4-glikozydowe

2 czasteczki karagenianu tworza podwójną helise i wraz z jonami K uklada się w trójwymiarowa siec tworząc tzw domene

Kappa (κ)i iota(ι) maja zdolność tworzenia żeli

Wraz ze zmniejszeniem gr SO₃^- maleje elastyczność, ilość czast. Polisacharydu

Wzrasta sztywność i kruchość żeli

Wraz ze zmniejszenie zaw. Anhydrogalaktozy wzrasta wrazliowosc na dział. Jonów i zdolność żelowania.

Dodatek do żywności, leków.

Nośnik do pulapkowania komórek i enzymów.

12. W piekarstwie:

Enzymy apolityczne i proteolityczne

13. Pod wpływem siły odśrodkowej nastepuje rozdiał czasteczek różniących się gęstością. Ten proces to:

wirowanie

14. Upłynnianie skrobi

Najczesciej stosowane 1-etapowe upłynnianie. Polega na:

- ogrzewanie zawiesiny skrobi z dodatkiem termo stabilnej α-amylazy, jonów wapniowych strumieniem pary (105-107*C) przez 5-8min

- nagle schlodzenie do 95*C

- powtorny dodatek enzymu

-dekstrynizacja

15) Rozkład wiazan 1,6-glikozydowych w amylopektynie

Tu nie jestem pewna. Wiazanie 1,6 niby rozklada glukoamylaza ale ta pullalanaza przyspiesza … ogolnie jest o tym w artyk Żyły na stronie 44

16)Immunoenzymatyczna metoda ze zwielokrotniona reakcja enzymatyczna (EMIT)

Metoda homogenna, kompetencyjna, pozwala na wykoanie oznaczenia z pominieciem procesu separacji kompleksu.

Wykorzystuje ona możliwość zmiany aktywności enzymu przez blokowanie miejsca aktywnego dla substratu lub przez zmiane konformacji czasteczki enzymu.

W metodzie wykorzystuje się antygen sprzężony z enzymem i przeciwciała specyficzne dla antygenu.

Podczas wiazania powstałego koniugatu Ag-Enzym ze specyficznym dla niego przeciwciałami dochodzi do zahamowania akt. Enz. Kompleksu. Po dodaniu próbki, antygen znakowany enzymem współzawodniczy z antygenem z próbki o miejsce wiązace w czasteczkach przeciwciała.

Do ozn. Subst. Drobnocząsteczkowych, haptenow, leków

Spektrofotometryczne ozn. Białek

Absorbancja w nadfiolecie,

Większość bialek (dzieki obecn tyrozyny i tryptofanu) ma max absorbancji przy 280nm. Zwiazkami które mogą wpływac na ta wartość sa kwasy nukleinowe (max przy 260nm)

C_białka= 1,55 *A_280nm - 0,76 * A_260nm

Bład: rozne bialka i kwasy nukleinowe, w jednakowych stężeniach nie daka identy. Absorbancji max.

Wiele puryn, pirymidyn, fenoli (zw małoczast) ma duża absorbancje przy 260 i 280 nm

Metoda szybka, w małej ilości materiału, obecn duzych stezen soli, szeroko stosowana.

Nie, gdy >20% kw. Nukleinowych w mieszaninie

17)Met Bradforda. Za pomoca jakiej grupy barwnik Coomasie łaczy się i z czym? długość fali

Forma anionowa- niebieska, dl fali 590 nm, gl dla argininy

Metoda Bradforda wykorzystuje zdolność wiązania barwnika błękitu brylantowego Coomassie G-250 (ang.Coomasie Brillant Blue) z białkiem. W środowisku kwaśnym widmo absorpcji barwnika charakteryzuje się maksimum przy 465 nm, natomiast po związaniu białka maksimum przesuwa się w stronę fal dłuższych i występuje w przy 595 nm. Mając wyznaczoną krzywą kalibracyjną dla wzorcowego białka (np. BSA, IgG) można określać zawartość białka w badanej próbce poprzez pomiar zmiany absorbancji w 595 nm roztworu barwnika po dodaniu do niego badanej próbki.

Większość białek dzięki obecności aminokwasów aromatycznych tryptofanu i tyrozyny, wykazuje maksimum absorbancji przy około 280 nm co pozwala na oznaczenie zawartości białka w roztworze przez bezpośredni pomiar absorbancji w nadfiolecie

18) Met. Lowryego

Kolorymetryczna, dwie reakcje

I)R.Biuretowa

Białko+ jony miedzi(ph zasad)

(w.peptyd)

II)R.Redukcji (ph10)

Odczynnik Folina-Ciocalteu redukcja Błekit fosfomolibdenowy

(fosfomolibdeno-fosfowolfram)

|

Kwas ortofosforowy i kwas molibdenowy

Czulsza metoda od biuretowej 100x

Pozytywna reakcja (nieb) białka, łanc polipept, tyrozyna, tryptofan, fenole, puryny, pirymidyny, kw moczowy)

19) Jednostka aktywności pektyno esterazy

Jednostkę aktywności pektynoesterazy (PE) okreslamy taka ilość enzymu, która w czasie 1 minuty uwalnia 1µmol metanolu. Ilosc zuzytego NaOH jest const do ilości uwolnionego metanolu.

20) Jednostka miedzynarodowa

Międzynarodowa jednostka enzymu (U) jest to taka ilość enzymu, która katalizuje przekształcenie 1 mikromola substratu w ciągu 1 min w temp. 30°C przy nasyceniu enzymu substratem i przy optymalnym pH dla jego aktywności.

Grupa B

1. Metoda kanapkowa- test immunoenzymatyczny

Może być wykorzysta. Do wyznaczania ilości określonego bialkoweho antygenu w próbie.

Do obojetnie chemicznego polimerowego podloza przylacza się przeciwciało, po czym naklada się na badana próbe.

Po wymyciu niezwiązanego bialka dodaje się drugie przeciwciało i rozpoznające inny epitot antygenu. To drugie przeciwciało jest znakowane za pomoca enzymu przekształcającego bezbarwny substrat w barwny il bialk. Antygenu wyznaczymy w próbie przez okreslenie intens. powstałej barwy

2. 4 zalety ELISA w analizie żywności:

- łatwość wykonania-

- Możliwość rutynowego, jednoczesnego przeanalizowania duzej liczby prób w tym samym czasie (monitoring

- szerokie spektrum (zaw drobnoustr, ich metabolitow, toksyn, antybioz, pestycyd, lipidów, polisacharyd, witamin, leków, zw.alergennych)

- wysoka czułość

- bezpieczniejsza

- oszczedna

3. Stosujac ELISA można wykryc aflatoksyny, kt mogą wyst w zbozu, kukur, orzechach zaatakowanych plesniami ASPERGILLUS FLAVUS i APSERGILLUS PARASTIKUS które maja zdolność do prod aflatoksyn

4. Fałszywe. Wysokometylowane pektyny:

Zdolne do tworzenia żeli niskocukrowych lub bezcukrowych w obecn jonow Ca (FAŁSZ??)

5. Dlaczego przy oznaczaniu akt.pekrynoesterazy utrzymuje się stale nie przekraczające 7,3pH?

1. Powyżej tego pH dezaktywacja enzymu

2. Rozpad substratu

3. Powyżej tego pH akt enzymu nie jest max

4. Wszystkie odp poprawne

6. Przykład polisacharydu kwasnego uzywanego przy pulapkowaniu

agaroza, karaginian

7. Pulapkowanie fizyczne na:

- adsorpcja enzymu na nierozpuszczalnej matrycy

- pułapk. Biokataliza. Wewnątrz struktury Nat lub synt polimerow

8. Żel poliakrylamidowy

- powstaje gdy liniowe łancuchy zbud z jednostek akryl amidu zostana usieciowane przez tworzenie poprzecznych wiazan z N,N''metylenobisakrylamidem (BIS)

- wlk porów w zelu może być regulowana zarówno przez zmiane całkowitego stez akryl amidu T% (AA+BIS) jak i przez zmiane stosunku obu monomerów C% (BIS/AA)

9. Allosteria miano powinowactwa chemicznego białka do cząsteczek (np. enzymów do substratów lub białek przenośnikowych do ich ładunku), przez zmianę struktury przestrzennej. Efekty allosteryczne odgrywają istotna rolę w regulacji aktywności enzymatycznej.

Niektóre enzymy, to enzymy allosteryczne, zmieniające swoją konformację w odpowiedzi na związanie efektora (inhibitora lub aktywatora)

10. Enzymatyczna hydroliza laktozy w serwatce lub w mleku jest procesem realizowanym w systemie ciągłym z wykorzystaniem:

Galaktozydazy

11. Preparat- PEKTOPOL - zawiera enzym prod. Przez Bacillus subtilis

aspergillus niger

12. Co otrzymujemy w wyniku działania izomerazy glukozowej?

??

13. Czemy enzym nieruchomiony jest lepszy od ruchomego (???!!!?

Można uzyc wielokrotnie

14. Zalety pułapkowanie

- nie niszczy struktury enzymu (poliakrylamid)

- łatwy, odporny, nie klei się (poliakrylamid)

- miekki, nie rozmazuje się (żelatyna)

15. β-galaktozydaza

16. syrop glukozowy (bakterie)

17. procesy technologiczne w których sa stosowane preparaty enzymat. Rozluzniające:

- prod. Kiszonek

- procesy ekstrakcji barwników i zw. Zapach

- technologia kawy rozpuszcz.

- przetwórstwo soi

- przem. Olejarski

- prod. Wina ( zw. Wydajn. Tłoczenia, zw. Ekstrakcje zw. Barwnych i aromatow z tkanki, przyspiesza i polepsza klarowanie moszczu, szybsza i spokojna fermentacja, zmniejszenie pienienia się, ułatwia filtracje, przyspiesza dojrzewanie wina)

18. Fitazy- w procesie mokrego mielenia ziarna (kukur, pszenica) dodatek fitazy pozwala uzsykac bezfitynianowe namoki zbozowe (możliwe że zwieksza termostabilnosc α-amylzay, która w procesie upłynniania skrobi przeprowadza w znaczacy spsoć hydrolize niektórych rodzajow natywnej i nieskleikowanej skrobi)

19. Enzymy powodujące mętnienie wina:

Endogenna oksydaza polifenolowa (tyrozynaza) owoców

Oksydaza polifenolowa syntetyzowana przez Bacillus cinerea (lakkaza)

1.Jaki enzym nie może hydrolizować wiązania 1-6 glikozydowe?
a)alfa amylaza
b)beta amylaza
c) glukoamylaza
d) odp a i b sa poprawne

2. Jakie długości fragmęty restrykcyjne otrzymy w wyniki cięcia DNA enzymem restrykcyjnym E.Coli.

a)64bp
b)256bp
c)4,06 kb
d)2,(cośtam)

3.. Jakie długości fragmęty restrykcyjne otrzymy w wyniki cięcia DNA enzymem restrykcyjnym H(cośtam) pamiętam że w wykładach jest to pierwsza bakteria w tabeli po E.Coli

a)64bp
b)256bp
c)4,06 kb
d)2,(cośtam

4.Kukurydza woskowa zawiera- 2% skrobii
5.Jaka bakteria ma dwuwarstwowoą ściane komórkową z 6 rzedami białka Svr
a)E.Coli
b)Bacillus Subtis
c) Corynebacterium
d)......... gukanum


5.Jaki środek enzymatyczny jest niezbędny do przeprowadzanie klonowania- ligaza(odpowada za łączenie lepkich końcy)

6. Najtańsza metoda zagęszczania:

7.Jakie substancje przechodza przez membranę półprzepusczalna odczas odwrotnej osmozy

6.Wektorem nie jest
a) YAC
b) BAC
c) MAC
d) DAC

8.Bakteria która jest wektorem roślinnym- Agrobacterium Tumefaciens

9.Wirówka która może powodować denaturacje materiału
a)sedymentacyjna
b)samooczysczająca
c)talerzowa
d)...nie pamietam

10.Ułóż w kolejności mikroorganizmy tworzące kwas cytrynowy, mlekowy, whisky, kwas glutaminowy( wyklad 2)

11.W izolacji dna jaka funkcje spełnia chloroform- poprawie denaturuje nukleazy

12.jaką metoda chromatografii najlepiej oznaczyć białko

13. Do oznaczenia bialka metoda chromatoogrfii stosujemy
a) CM ph=1
b) CM ph=8
d) DEAE ph1
c) DEAE ph=8
14. Jaka cecha należy do bioreaktora biologicznego a nie chemiczego
a) kontrola pH
c) kontrola temp
d) mieszanie i napowietrzanie
b) .....nie pamiętam ale wdg mnie chodziło mieszanie i napowietrzanie
15. Jakie frakcje buduja micelle kazeinowe
16. Co powstanie w w wyniku enzymatycznej koagulacji białka mleka przez przeciezcie wiąania 105-106...
kappa- kazeina- glikomakropeptyd c) glukoamylaza grzybowa

Wielkość membran nanofiltacj
a)2-8 A
b)10-1000A..

W którym momencie przepraowadza się filtracie inkolum (czy jakoś) chymozyny brzeczki
po za inkulowaniu....przed chromatografią....

Wektor oprócz sekwencji.....zawiera
a) sekwencję mri
b)sekwencie cos
c)m

w procesje mikrofiltracj wielkocząsteczkowe pozostają w
a) nadawie
b)retetenacjie
c) permeacie

Szczawiooctan jest prekurowrem
b) treoniny, asparginy, metioniny,

Związek meto coś jest w chromatkografi membranowej składnikiem ...płynu bo
a) buforuje
b) stanowi bilogiczną przyczepność
c) chea...

Podczas ekspresji , największą sekrecjie mają
a) bakrerie
b)grzyby

---