Elektroforeza biaÅ‚ek w agarozie, skÅ‚ad jonowy biaÅ‚ka, pI,Þnsytometria

Forma jonowa białka zależy od składu aminokwasowego (czy budują go aminokwasy kwaśne, obojętne czy zasadowe) oraz pH roztworu go otaczającego. Każdy z budujących białko aminokwasów ma swój punkt izoelektryczny pI, który określa pH, w jakim aminokwas występuje jako obojętna sól wewnętrzna. Wartość ta jest oznaczana często w odniesieniu do białek i aminokwasów, metodami polarymetrycznymi, chromatograficznymi (ogniskowanie chromatograficzne) i elektroforetycznymi (ogniskowanie izoelektryczne) Ponadto istnieje możliwość wyznaczenia wartości teoretycznej dla białek na podstawie równania Hendersona-Hasselbacha.

Dla aminokwasu zawierającego jedną grupę aminową i jedną grupę karboksylową wartość pI można obliczyć w na podstawie wartości pKa1 i pKa2 danej cząsteczki:

pI = ½(pKa1 + pKa2)

W pH poniżej pI białka mają ładunek dodatni, zaś powyżej ich ładunek jest ujemny. Ma to duże znaczenie w czasie rozdziału metodą elektroforezy. pH żelu elektroforetycznego zależy od użytego buforu. Jeżeli pH buforu jest wyższe od pI białka, to będzie ono migrować w kierunku anody (ujemny ładunek – anion, jest przyciągany do niej). Z drugiej strony jeśli pH buforu jest niższe od pI białka będzie ono się poruszać w kierunku ujemnie naładowanej strony żelu (kationy będą wędrować do katody). Białko nie będzie migrować jeśli pH buforu i pI danego białka będą sobie równe.

Elektroforeza białek surowicy w agarozie przy zasadowym środowisku daje odrębne frakcje: albuminy oraz, alfa1, alfa2, beta i gammaglobulin, przy czym albuminy przeważają z blisko 60% udziałem. Białka te można potem barwić – wszystkie np. błękitem bromofenolowym, szczególne grupy np. glikoproteiny oraz te odpowiedzialne za jakąś biologiczną aktywność np. enzymy dehydrogenazy mleczanowej). Obraz po elektroforezie jest mierzony za pomocą densytometru, który przetwarza dane w sposób graficzny, tworząc górki na wykresie, które odpowiadają ilości danych białek; z racji tego , że albuminy wędrują najszybciej podczas elektroforezy do elektrody dodatniej, są one zaznaczone jako pierwsza górka; jest ich też najwięcej, więc ta górka jest największa.

Elektroforeza surowicy jest ważnym elementem w diagnostyce medycznej. Zaburzenia profili densytometrycznych dla białek i glikoprotein może wskazywać na brak jakiś białek bądź ich nadmiar, które sugerują o stanie chorobowym, np. ostry stan zapalny powoduje zwiększenie zawartości alfa-globulin i obniżeniem zawartości beta-globulin. Rozpoznawanie stanu chorobowego bazując na wykresie densytometrycznym to analiza densytometryczna.
Hipoproteinemia – zmniejszenie stężenia białek (lub jednej ich frakcji) we krwi; względna – wynik nadmiernego podawania płynów w infuzjach; rzeczywista – wydalanie albuminy w moczu, hiper – zwiększone: względna przez odwodnienie, rzeczywista – przez zwiększone stężenie Ig, dysproteinemia – jakościowe i ilościowe zmiany w stężeniu białek osocza, np. w przypadku stanów zapalnych, choroby nerek, marskości wątroby.


Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Elektroforeza białek na żelu poliakrylamidowym w układzie Laemmli’ego oraz blotting białek na membra
12 Elektroforeza agarozowa wyizolowanego DNA ?łkowitego oraz produktów PCR
Aminokwasy i białka Koagulacja i?naturacja białek
Aminokwasy i białka Reakcje charakterystyczne białek reakcja biuretowa
Białka opiekuńcze,?gradacja białek
biologia, bialka, 1 I rzedna struktora bialek- peptydy w budowie jednej plaszczyzny
Aminokwasy i białka Reakcje charakterystyczne białek reakcja ksantoproteinowa
Laboratorium PI, Elektrotechnika AGH, Semestr I zimowy 2012-2013, Podstawy Informatyki laboratorium
2 Elektroforeza preparatywna w żelu agarozowym
Jakie zabiegi wchodzą w skład elektroterapii, Artukuły fizjoterapia
Zależności przenikalności elektrycznej i współczynnika strat tg δ Dielektryków jonowych od temperatu
Pytania - test u Pi-ata (energoelektronika), EiE test piłat 07.06.2009, elektronika
1 Skład i struktura białek
elektroforeaza dna w elu agaroz Nieznany
Fosfolipidy i białka - biologia, Fosfolipidy (inaczej fosfatydy lub fostotłuszczowce) to lipidy, w k
12 Elektroforeza agarozowa wyizolowanego DNA ?łkowitego oraz produktów PCR
Coraz bliżej stałych elektrolitów w bateriach litowo jonowych
Elektronika z wykorzystaniem Arduino i Rapsberry Pi Receptury elarra

więcej podobnych podstron