Wyposażenie pracowni mikrobiologicznej. Metody wyjaławiania. Mikroskop i technika mikroskopowania. Przygotowania preparatów. Mierzenie wielkości drobnoustrojów

Wyposażenie pracowni

-Pasteryzatory(aparat Kocha)-wyjaławianie w temperaturze 100^OC.Nośnik ciepła para wodna. Budowa od góry metalowy zbiornik z ażurowym dnem zamykany klapą .

-Autoklaw –aparat ciśnieniowy do sterylizacja podłoża sprzętu mikrobiologicznego .Kształt walca ustawionego pionowo temperatura 121-117^OC

-Suszarka –wyjaławianie szkła naczyń

-Filtry – wyjaławiania cieczy

-Termostaty –wielkie szafy do produkcji drobnoustrojów

-Wytrząsarki –służą do hodowli wgłębnej drobnoustrojów w warunkach tlenowych

-Anaerostaty –urządzenie wybija powietrze mieszaniną gazów która nie wchodzi w reakcje z drobnoustrojami (względnie wytwarzana jest w nich próżnia)

-lodówki zamrażarki –do produkcji psychrofilnych

-Wirówki –(wortex )-do rozprowadzenia materiału

-Lampy kwarcowe –do odkażania pomieszczeń

-sprzęt do sczepień –eza igła głaszczka-to druciki platynowe osadzone w metalowym uchwycie służą do pobierania lub szczepienia materiału

Szkło

-komora lindera–wgłębianie na środku służy do czystych kultur

-komora Botchera –szklany pierścień otoczony wazeliną i woskiem do szkiełka przedmiotowego używany do hodowli czystych kultur

-Płytki petriego -2 zachodzące na siebie płytki stosowane do hodowli liczenie badanie diagnostyczne

-probówki –do skosów i tym podobne

-rurki durhama-małe szklane probóweczki które służą do stwierdzenia czy wydzielany jest gaz

-pipety bakteriologiczne –przenoszenie precyzyjnie płynu 1cm³

-kolby fermentacyjne –służą do hodowli drobnoustrojów na podłożach płynnych

Metody wyjaławiania

-termiczne

+na sucho(wyżarzanie, opalanie, wyjaławianie w suszarkach)

+na mokro(sterylizacja, pasteryzacja, tyndalizadcja czyli pasteryzacja frakcjonowana)

-chemiczne(alkohol, formalina, czwartorzędowe związki amonwe ,sole metali ciężkich, kwasy zasady środki utleniające )

-filtracja

-promieniowanie

Mikroskop

Powiększenie mikroskopu równe jest iloczynowi powiększenia obiektywu i powiększeniu okularu

Zdolność rozdzielcza mikroskopu –najmniejsza odległość między dwoma punktami dostrzegalnymi jako punkty oddzielne

Odległość robocza-to odległość między preparatem a soczewką czołową

Pożywki. Techniki posiewów. Czyste kultury. Metody hodowli drobnoustrojów. Barwienie drobnoustrojów.

Pożywki (jest to podłoże na którym rozwijają się mikroorganizmy )

-substancje odżywcze

+źródło węgla (najczęściej cukier 0,5-2%)

+źródło azotu (NaNO₃ , NH₄NO₃ żelatyna białka rodzime 0,5-2%)

-sole mineralne(dodawane do pożywki ma właściwości buforujące)

-czynniki wzrostowe(ekstrakt drożdżowy bulion witaminy)

-czynniki wybiórcze (substancje ograniczające wzrost jednych drobnoustrojów)

-czynniki zestalające

+agar- 100^OC upłynnienie 45^OC zestalania 1,5-2% agaru, agar hydrolizuje w niskim pH

+żelatyna-30^OC upłynnienie 20^OC zestalanie 12-15% żelatyny, żelatyna kilkakrotnie ogrzewana traci swoje właściwości

+oprócz wyżej wymienionych możemy użyć żelu krzemionkowego jaj surowicy krwi

Podział pożywek

-ze względu na dobór składników

+naturalne

+półsyntetyczne

+syntetyczne

-zawartość składników

+podstawowe

+wzbogacone

-celów

+identyfikacja

+izolacja

+namnażające lub namnażanie wybiórcze

-konsystencja

+płynne

+półpłynne

+stałe

Techniki posiewów

Płynnej na

-płynną

-na skos

-na płytkę

+powierzchniowa

+wgłębna

Z stałej na

-płynną

-skos

-płytkę

Czyste kultury-Kolonia powstała z jednej komórki drobnoustrojów

Techniki otrzymwania kultur

-rozcieńczenie –tak rozcieńczać żeby w 1cm³ była jedna komórka

-metoda płytkowa –

+posiew stały ezy

+metoda płytek lanych –na płytce się rozcieńcza i robi rozmazy

+metoda kropelkowa- dajemy 1-2 kropli badanego drobnoustroju

-metoda tuszowa- dajemy 1:10 tuszu chińskiego i hodujemy na szkiełku przedmiotowym

-metoda zastosowaniem mikromanipulatora

Metody hodowli

-hodowle statyczne –jednorazowe zaszczepienie pożywki

-hodowle ciągłe –wprowadzanie cały czas pożywki

-hodowle synchronizowane –wszystkie komórki dzielą się tak samo

Metody hodowli drobnoustrojów beztlenowych

-metody biologiczne –połowa beztlenowych polowa tlenowych szczelnie zamknąć

-metody fizyczne –sztuczna próżnia ,oddzielenie agarem odżywczym (metoda wilson-blair)

-metody chemiczne –wypełnienie mieszaniną gazów

-metoda mieszana –hodowla na podłożu Wrzoska z wątrobą lub hodowle kłute

Hodowla drobnoustrojów tlenowych

-powierzchniowe

+podłoża płynne

+podłoże stałe

-wgłębne

+wstrząsarki

+tkanki fermentacyjne

Barwienie

Barwniki używane w mikrobiologii zasadowe

-fiolet krystaliczny, goryczkowy, metylowy

-czerwień obojętna

-fuksyna zasadowa

-błękit metylowy

-zieleń malachitowa i metylenowa

Barwniki używane w mikrobiologii kwaśne

-fuksyna

-eozyna

-erytrozyna

-barwnik kongo

-nigrozyna

Barwienie

-przeżyciowe –żywe drobnoustroje są barwione

-preparaty utrwalone-to barwienie możemy podzielić na

+proste-działamy jednym barwnikiem

+złożone-kilka barwników

+negatywne- barwienie tła

Wykonanie barwienia

-rozmaz –oddtłuszczone szkiełko + kropla wody +eza

-utrwalenie preparatu chemicznie lub fizycznie

-zabarwienie komórek

Barwienie grama

Fiolet goryczkowy lub krystaliczny(2minuty zlać )

Płyn lugola(1minuta)

Odbarwienie alkoholem skazonym (20-30sek)

Zlać wodą

Dobarwić fuksyną fenolową (10-20rozcieńczoną)(15-20sek)