MIC: w podłożu stałym, E-test, Vitek

Metody badania wrażliwości bakterii na antybiotyki - ilościowe

MIC na podłożu stałym:

• wysiewamy odpowiednio rozcieńczoną hodowlę na serię podłóż (podłoże Mueller-Hinton), które zawierają odpowiednie stężenia leku

• antybiotyk w stężeniach od 0,25 mg/l do 128 mg/l

• inkubacja 18 h

• odczytujemy MIC - najniższe stężenie antybiotyku przy którym nie ma wzrostu na podłożu

E-test:

• określenie stopnia oporności od niskiego do wysokiego

• Breakpoint (BP)/MIC = indeks PK/PD = indeks BMQ

• najwyższy indeks BMQ - największa oczekiwana skuteczność terapeutyczna

• Breakpoint - stęż. graniczne wartości MIC

• PK - farmakokinetyka - zmiany stężenia leku w ustroju w czasie

• PD - farmakodynamika - sposób wywierania efektu przez lek

• dyfuzja antybiotyku z cienkiego plastikowego paska zgodnie z gradientem stężeń

• MIC - wielkość i miejsce gdzie kończy się strefa zahamowania wzrostu

• aby ustalić maksymalny efekt bakteriobójczy wykorzystujemy parametry:

• C_max = stęż. max.

• T>MIC = czas, w którym stężenie leku utrzymuje się powyżej MIC

• AUC/MIC = pole pod krzywą wchłaniania antybiotyku/MIC

• antybiotyki zależne od T>MIC: beta-laktamy, wankomycyna, klindamycyna; często/wlew ciągły

• antybiotyki zależne od C_max: aminoglikozydy; cała dawka dobowa jednorazowo

• efekt poantybiotykowy: zahamowanie wzrostu bakterii pomimo spadku stęż. poniżej MIC: aminoglikozydy, imipenem

Vitek:

• automatyczny system komputerowy

• po kilku h !

• zakres 3 - 4 rozcieńczeń

• tylko zakres wartości MIC (nie dokładny MIC)

!!! MIC konieczny:

• ciężkie inwazyjne zakażenia (sepsa, ZOMR, BZW, zap. kości, zap. płuc)

• immunosupresja (chemioterapia, noworodki)

• pacjenci OIT - stany krytyczne

• zaburzenia funkcji narządów - zmiany PK

• materiały fizjologicznie jałowe (krew, płyn MR, BAL, tkanki)

• alert-patogeny, MDR

• dynamika zmian MIC w trakcie leczenia (kontrola zakażeń szpitalnych)

Testy ATB, testy do ESBL, MBL, KPC, MRSA, HLAR, MLS-B, VRE, PRSP

Metoda pasków ATB: metoda badania lekowrażliwości - jakościowa

• paski zawierają dwa stęż. antybiotyku c i C (20 różnych antybiotyków); ATB Staph, ATB Strep, ATB Enterococcus, ATB Ana, ATB G-, ATB Pse, ATB Haem

• do dołków wprowadzamy zawiesinę bakterii z płynnego podłoża M-H

• inkubacja 18 h

• odczyt przez laserowy czytnik programu komputerowego

• interpretacja:

• c+ C+ = R (oporny)

• c+ C- = I (średniowrażliwy)

• c- C- = S (wrażliwy)

testy do ESBL, MBL, KPC, MRSA, HLAR, MLS-B, VRE, PRSP

kolokwium II, pytanie 18 i 19

materiały od naszej pani - testy specjalne dla bakterii Gram-dodatnich i Gram-ujemnych

Testy specjalne

Wyróżniamy testy specjalne dla bakterii Gram (+) lub Gram (-)

1. BAKTERIE GRAM-DODATNIE

Gronkowce

1. wykrywanie szczepów MRSA, MRSE, MRCoNS ALARM !!!

• Krążek z cefoksytyną (FOX): średnica ≥ 20 dla S. aureus (S), ≥ 25 (S) dla gronkowców koagulazoujemnych

NIE STOSOWAĆ ANTYBIOTYKÓW β-LAKTAMOWYCH !!!

Możliwe leki: ciężkie zakażenia - wankomycyna, teicoplanina, oraz nowe leki: linezolid, tigecyklina;

łagodne zakażenia - trimetoprim / sulfametaksazol (Biseptol)

2. wykrywanie szczepów VISA, VRSA ALARM !!!

E-test z wankomycyną (wartości MIC: patrz lista szczepów alarmowych)

Paciorkowce

1. wykrywanie szczepów PRP (lub PRSP) ALARM !!!

E-test na podłożu Mueller-Hinton z krwią

Interpretacja wartości MIC w zależności od jednostki chorobowej oraz sposobu podania leku (patrz lista szczepów alarmowych)

2. wykrywanie szczepów HLAR (paciorkowce kałowe - Enterokoki)

GentaR i StreptaR to HLAR (+)

GentaR i StreptaS to HLAR (+) (HLGentamycinR(+))

GentaS I StreptaR to HLAR (+) (HLStreptomycinR(+))

GentaS I StreptaS to HLAR (-)

• Dwa krążki: gentamycyna, streptomycyna (≥ 7 oporny)

Enterokoki są naturalnie oporne na cefalosporyny i klindamycynę. Szczepy wrażliwe na penicyliny (głównie E. faecalis) mogą być leczone ampicyliną, amoksycyliną, piperacyliną, a w cięższych zakażeniach jak zapalenie wsierdzia z dodatkiem aminoglikozydu (sprawdzić HLAR). Szczepy oporne na penicyliny (gównie E. faecium) leczy się glikopeptydami (teicoplanina bardziej aktywna niż wankomycyna).

3. wykrywanie szczepów VRE (Enterokoki) ALARM !!!

E-test (MIC ≥ 32 mg/l)

Leczenie: linezolid, chinuprystyna zdalfoprystyną (SYNERCID), tigecyklina

Gronkowce i paciorkowce

1. wykrywanie oporności na makrolidy, linkozamidy, streptograminy B (test MLS_B)

Dotyczy szczepów opornych na erytromycynę

• Dwa krążki: Erytromycyna, clindamycyna (Dalacin)

INDUKCJA (-) INDUKCJA (+)

E - R, Cli - S E- R, Cli -R

Oraz nie stosować makrolidów 14-, 15- to członowych

TESTY SPECJALNE

2. BAKTERIE GRAM-UJEMNE

1. wykrywanie szczepów ESBL (Extended spectrum beta-lactamase = beta -laktamaza o rozszerzonym spektrum substratowym) ALARM !!!

Kilka sposobów:

• test badania synergizmu (DD) wg Appleton, cztery warianty, różnica średnic ≥ 5mm

• test zbliżeniowy dwóch krążków (DDST) wg Jarliera, odkształcenie stref zahamowania wzrostu

• test różnicowania MIC (różnica MIC ≥ trzem kolejnym rozcieńczeniom)

• E-test ESBL (różnica MIC ≥ trzem kolejnym rozcieńczeniom, lub odkształcenie stref zahamowania wzrostu bakterii)

Test DD wg Appleton

Jeśli ESBL(+) to NIE PODAJEMY PENICYLIN, CEFALOSPORYN, MONOBAKTAMÓW !!!!

Skuteczne leki z inhibitorami β-laktamaz (patrz lista antybiotyków , punkt 1H), oraz karbapenemy i tigecyklina.

ESBL najczęściej produkują E. coli, Klebsiella pneumoniae i Klebsiella oxytoca.

2. wykrywanie szczepów MBL (metalo-beta laktamaza) ALARM !!!

Różnica średnic wokół krążków z IPM i CAZ ≥ 5mm lub strefy odkształcone od strony EDTA

Jeśli MBL(+) to NIE PODAJEMY KARBAPENEMÓW (podać przykłady z listy antybiotyków), a także MONOBAKTAMÓW

Narasta liczba szczepów Pseudomonas aeruginosa opornych na karbapenemy - szczepy CRPA (carbapenem resistant Pseudomonas aeruginosa), wrażliwych tylko na kolistynę. W zakażeniach wywołanych przez ten drobnoustrój powinno się stosować leczenie skojarzone np. β-laktam z aminoglikozydem lub z cyprofloksacyną. W infekcjach trudnych można dodać ryfampicynę (szczepy tworzące biofilm).

Obserwuje się wzrost szczepów Acinetobacter baumannii opornych na karbapenemy -szczepy CRAB (carbapenem resistant Acinetobacter baumannii). Stosuje się kolistynę lub tigecyklinę.

3. wykrywanie szczepów KPC (Klebsiella pneumoniae oporna na karbapenemy) ALARM !!!

- PCR : geny bla _KPC

- Test na podłożu Muellera-Hintona z kwasem fenyloboronowym

Gdy strefy wokół krążków z kwasem fenyloborowym różnią się od stref z antybiotykiem szczep oznaczamy jako KPC (+)

Gdy strefy wokół samego antybiotyku i antybiotyków z kwasem są identyczne mówimy o KPC (-)

III. PODŁOŻA CHROMOGENNE - przyspieszają detekcję szczepów alarmowych

MRSA

VRE

ESBL

KPC

klindamycyna

erytromycyna

Amoksycylina + kw. klawulanowy

Ceftazydym (CAZ)

Cefoksytyna (CFX)

AZT

ESBL (+)!!

Imipenem (IPM)

EDTA (kwas etylenodiaminotetraoctowy)

CAZ

Meropenem (MEM)

IPM

IPM + kw. fenyloborowy

MEM + kw. fenyloborowy

---