kiedy można stosować standardy zewnętrzne a kiedy wewnętrzne?
jak masz mało materiału to jakiego startera użyjesz?
więcej nie pamiętam:P

Czemu się używa PCR? > mamy mało DNA, a chcemy mieć duuuuuuuużo! Czemu się używa RT-PCR? > chcemy wiedzieć, ile mieliśmy DNA (cDNA) na początku Jakie można zastosować startery w naszym badaniu do namnożenia mRNA? a. specyficzne (bo namnożą tylko ten kawałek co nas interesuje) b. oligo dT (bo namnożą wszystko - łączą się z końcem poli-A) Jeśli mamy mało mRNA ogółem, to lepiej użyć oligo dT. Dlaczego to nie jest ważne, czy mRNA jest namnożone specyficznie? Bo do reakcji PCR w termocyklerze i tak się daje parę specyficznych starterów.

_________________

1. Analiza wykresu, w którym przeprowadzonym PCRze będzie więcej wyjściowego cDNA (w tym, dla którego Ct jest bliżej osi y).
2. Dlaczego w r-t PCR nie mierzymy tylko na początku i na końcu (bo na końcu zawsze będzie tyle samo namnożonego materiału po 40 cyklach i dlatego trzeba zliczać przyrost po każdym).
3. Reakcja odwrotnej transkryptazy. Czego potrzeba, aby zaszła w probówce i na czym polega?
4. Sposoby ekstrakcji RNA/DNA i opisać metodę Chomczyńskiego i na mikrokolumienkach.
5. Jak zbadać czystość zamplifikowanych cDNA (ta metoda z temperaturą topnienia).
6. Znakowanie starterów (rodzaje i mechanizm działania, dlaczego wykazują fluorescencję?)