OKREŚLENIE LICZBY BAKTERII W ŚRODOWISKU WODNYM: METODY POŚREDNIE- A) metoda posiewu wgłębnego- przeprowadzamy na podłożu agarowym, przygotowuje się pustą płytkę jałową i nanosi 1cm3 badanej wody, następnie zalewamy przestudzony agar (jeszcze w stanie płynnym); Mieszamy podłoże z 1cm3 badanej wody w celu wymieszania w całej obj. Zostawiamy do zastudzenia. Umieszczamy w inkubatorze na min 24h. Temp jest zależna od rodzaju bakterii (np. psychrofilne 20C, termofilne 44C. Nasza temp to 26C- jest dobra dla bakterii psychrofilnych, za mała dla rozwoju termofilnych i za niska dla mezofilnych); różnice między metodą powierzchniową: agar może być za ciepły i może zabić bakterie, siane bakterie tlenowe mogą znajdować się przy samym dnie podłoża i się nie rozwijać; bezwzględne beztlenowce gdy dostaną się na powierzchnię nie będą mogły się rozwijać ; A= a*10^n [JTK/cm3]; B) metoda powierzchniowa: przeprowadzamy na podłożu agarowym; różnice między metodą posiewu względnego: -beztlenowce nie będą się rozwijać gdyż wszystkie bakterie znajdują się na powierzchni agaru -podczas wcierania istnieje możliwość dostania się drobnoustrojów z powietrza -cześć bakterii po zakończeniu wcierania pozostaje na bagietce; A=a*10^(n+1) [JTK/cm3]; Wspólne do A i B: Do obliczenia kolonii wybieramy płytki na których znajduje się ok. 30-300 kolonii; z liczby kolonii wnioskujemy ile było komórek w badanej wodzie; Rysunek: Należy zastosowań takie rozcieńczenie żeby wywnioskować ile było komórek w wodzie na podstawie kolonii (będzie tyle kolonii że będziemy w stanie je policzyć, trzeba uwzględnić ile razy była rozciecz probka i pomnożyć o tę liczbe aby policzyć kom); BAKTERIE GRUPY COLI- wszystkie nieprzetrwalnikujące względnie beztlenowe pałeczki Gram(-), które posiadają zdolność do fermentacji laktozy z wytworzeniem produktów kwaśnych i gazowych podczas 48h hodowli w temp 37C. Naturalnym środowiskiem namnażania się tych bakterii są przewody pokarmowe ludzkie i zwierzęce. Do bakterii grupy coli należą oprócz gatunku Escherichia coli, także pałeczki z rodzajów Enterobacter, Klebsiella i Citrobacter, które zaliczane są do rodziny Enterobacteriaceae, a także laktozo-dodatnie szczepy pałeczek rodzaju Aeromonas z rodziny Vibrionaceae. Część bakterii z grupy coli charakteryzuje się tolerancją na wyższe temp są termo tolerancyjne (fermentują laktozę w 44C);

JEŻELI W JAKIEJŚ WODZIE jest dużo bakterii z grupy coli jest duże prawdopodobieństwo tego że występują tam bakterie chorobowe np. Salmonella, oznacza to że do wody trafiają odchody ludzkie lubi zwierzęce (może wystąpić epidemia). Bakterie grupy coli są bezpieczne gdy występują w przewodzie pokarmowym lecz poza nim są niebezpieczne i mogą doprowadzić do choroby; WSKAŹNIK COLI- najbardziej prawdopodobna liczba komórek bakterii grupy coli w 100cm3; miano coli- najmniejsza objętość badanej próbki wody w której stwierdza się obecność co najmniej jednej komórki bakterii grupy coli; Metoda fermentacyjna probówkowa- wykrywanie bakterii grupy coli, przeprowadzamy na podłożu płynnym zawierace laktozę, czyli podłoże Eijkmana (podłoże laktozowe z purpurą bromokrezolową, zawiera składniki: laktoza, pepton, bromek sodu, purpura bromokrezolową-wskaznik). Do takiego podłoża dodajemy badaną wodę i wstawiamy na 48h w temp 37C; 3 cechy do analizy czy występują bakterie z grupy coli: -produkty gazowe będą widoczne dzięki rurce Durham (widoczny gaz w rurce) -produkty kwaśne- nastąpi zmiana barwy z fioletowej na żółtą -zmętnienie podłoża (świadczy o tym że są bakterie coli); Przygotowanie: wybieramy system posiewu np. system dwujkowy (dwuprobówkowy). Do pierwszych dwóch probówek dodajemy po 10cm3 wody, do 2 następnych 1cm3. Kolejne probówki to 10 krotne rozcieńcz. Przygotowujemy kilka rozcieńczeń i siejemy. Liczbę bakterii odczytujemy z tablic.; 2 2 2 0 0- NPL= 23 *10^2, miano coli= 4*10^-2; 2 2 0 0- NPL= 23* 10^1, miano coli= 4 * 10^-1; 2 2 1 0 0; 2 2 1 2 0; 2 2 1 1 1 0 (do ost podkreślonej jedynki dodajemy 1 które jest za nią); 2 2 1 1 0 0; Metoda filtracyjna- m wykrywania bakterii grupy coli, do tej metody trzeba mieć przygotowane płytki z podłożem MacConkey’a (podłoże wybiórcze lub różnicujące) - aparat do filtracji -filtry bakteriologiczne; Badając wody powierzchniowe bierzemy określone objętości zgodnie z Normy POL. Sączki do filtracji bierzemy jałowymi pensetami i kładziemy na płytki z podłożem, po odsączeniu wkładamy do cieplarki na 48h w temp 37C.Na podłożu takim nie wzrosną bakteria gram +. Podłoże zawiera laktozę. Jeżeli są tam bakterie grupy coli które rozkładają laktozę to ich kolonie będą miały kolor czerwony, ciemnoróżowy. Te które nie fermentują laktozy mają kolor bezbarwny;

Przygotowanie próbek GLEBY DO ANALIZY mikrobiologicznej: Po przyniesieniu gleby do laboratorium rozcieńczamy ją 10 krotnie w płynie fizjologicznym np. 10g gleby do 90cm3 płynu. Wytrząsamy ją przez 10 min na wytrząsarce. Podczas tych 10 min zostają wypłukane z pomiędzy gleby drobnoustroje, które przechodzą do płynu fizjologicznego. Czekamy później kilka minut aż grube cząstki opadną na dno. Płyn poddajemy badaniom pamiętając o tym że jest 10 krotnie rozcieńczony; ANALIZA POWIETRZA W powietrzu przez pewien czas utrzymują się drobnoustroje (drobnoustroje allochtoniczne). Drobnoustroje allochtoniczne- takie drobnoustroje obce które trafiają do wody lub powietrza z innych źródeł; 1. Metoda sedymentacyjna, opiera się na założeniu że w ciągu 5 min na powierzchnię 100cm3 spada tyle komórek drobnoustrojów ile zawartych jest w 10l czyli w 0,01m3 powietrza; A= (5*10^4*a)/ (p*t); A- liczba drobnoustrojów w 1m3; a- liczba koloni na płytce; t- czas otwarcia płytki [min]; p- powierzchnia płytki w [cm2]; Kładziemy przygotowane płytki z podłożem stałym w określonym miejscu, w którym mamy zbadać powietrze, otwieramy je na pewien czas (w zależności od drobnoustrojów). Następnie wkładamy do cieplarek na pewien czas na określoną temp; 2. Metoda uderzeniowa- strumień powietrza o ściśle określonym przepływie kieruje się poprzez niewielką szczelinę do komory wewnątrz której znajduje się płytka z jałowym podłożem. Zawarte w powietrzu komórki uderzają o powierzchnię podłoża i przylepiają się do niej, po czym rosną kolonie na podłożu