Chromatografia podziałowa

Wykonanie:

1. Przygotować parę czystych szalek Petriego o jednakowej średnicy i jedną szalkę o mniejszej średnicy;

2. Z bibuły Whatmana wyciąć krążek o średnicy większej o ok. 2 cm od średnicy przygotowanych szalek; w centralnej części krążka wykonać otwór o niewielkiej średnicy i wyrysować wokół niego, w odległości ok. 1,5 cm, okrąg - tzw. linię startu;

3. Wyciąć pasek bibuły o długości 25 cm i szerokości 1,5 cm i zwinąć go w tzw. knot, który należy włożyć w otwór krążka bibuły Whatman'a;

4. Szalkę Petriego o małej średnicy wypełnioną fazą n-butanolową umieścić
   w większej szalce, w której znajduje się woda;

5. Na linię startu nanieść po trzy krople odpowiednich roztworów aminokwasów (każdorazowo kroplę wysuszyć); na linii startu mieszaniny aminokwasów nanieść po 2 krople danego aminokwasu;

6. Krążek z bibuły umieścić w zestawie w taki sposób, aby knot zanurzony był
   w fazie n-butanolowej;

7. Zestaw przykryć szalką Petriego o dużej średnicy i pozostawić, aż faza n-butanolowa przewędruje do brzegu krążka bibuły.

Przygotowanie rozpuszczalnika:

1. Do rozdzielacza dodać n-butanol, lodowaty kwas octowy i wodę w proporcji 4:1:5;

2. Wytrząsać do uzyskania fazy wodnej i n-butanolowej;

3. Rozdzielić powstałe fazy.

Wywołanie chromatogramu:

1. Chromatogram pozostawić do wyschnięcia;

2. Zanurzyć krążek bibuły w roztworze ninhydryny;

3. Wysuszyć krążek za pomocą suszarki.

Tabela nr 1.

Współczynniki Rf:

Lp.	Nazwa aminokwasu	Odległość		Współczynnik przepływu Rf x/y
					Środka plamy od startu (x)[cm]	Czoła rozpuszczalnika od startu (y) [cm]
1	Alanina	2,3	5,5	0,42
2	Arginina	1	5,5	0,18
3	Leucyna	4	5,5	0,73

Tabela nr 2.

Identyfikacja aminokwasów w mieszaninie:

Lp.	Odległość		Współczynnik przepływu Rf x/y	Nazwa aminokwasu
		Środka plamy od startu (x)			Czoła rozpuszczalnika od startu (y)
1	2,3	5,5	0,42	Alanina
2	1	5,5	0,18	Arginina
3	4	5,5	0,73	Leucyna

Rysunek nr 1. Schemat chromatogramu.

mieszanina aminokwasów

linia startu

Alanina

Arginina

Leucyna