Nr. ćwiczenia: 8	Magdalena Firek	Nr. grupy: 7
Data wykonania ćwiczenia: 8.05.2013	Temat ćwiczenia: Wyznaczanie zależności natężenia fotosyntezy od natężenia PAR użycia gazowego analizatora podczerwieni.	Zaliczenie:
Data oddania sprawozdania: 15.05.2013

Definicje:

Reakcja Hilla jest dowodem na zachodzenie fazy jasnej fotosyntezy w wyizolowanych chloroplastach. Reakcja wywołuje się poprzez wprowadzenie indofenolu do zhomogenizowanych zielonych tkanek roślinnych. Indofenol odbarwia się z powodu zmiany stopnia utleniania, dzięki czemu można wykazać indukowany światłem przepływ elektronów w obrębie łańcucha fotosyntetycznego.

Gazowy analizator podczerwieni jest urządzeniem świetnie sprawdzającym się w terenie. Zasada jego działania oparta jest na pomiarach absorbcji w zakresie promieniowania podczerwonego. Zjawisko absorbcji w tym zakresie obserwuje się dla różnych gazów, takich jak CO₂, czy pary wodnej, co umożliwia pomiary między innymi procesów fotosyntezy i transpiracji.

Próba Sachsa inaczej zwana próbą jodową; sposób określania zawartości skrobi w badanym materiale.

Ćwiczenie 1.

Wyznaczanie zależności natężenia fotosyntezy od natężenia PAR użycia gazowego analizatora podczerwieni.

Wykalibrowano urządzenie w celu wyrównania parametrów. Umieszczono badany liść w komorze pomiarowej i ustawiono natężenie promieniowania fotosyntetycznie aktywnego na wartości: 100 µmol/m²/s, 500µmol/m²/s, 750 µmol/m²/s, 1000 µmol/m²/s , 1500 µmol/m²/s, 2000 µmol/m²/s. Po kilku minutach (po każdej zmianie PAR) dokonywano odczytu natężenia fotosyntezy [µmol CO₂/m²/s].

Wyniki:

Natężenie fotosytetycznie aktywne (PAR) [µmol/m^2/s]	Natężenie fotosyntezy [µmol CO2/m^2/s]
100	4,01
500	5,63
750	7,37
1000	8,3
1500	8,47
2000	8,39

Świetlny punkt wysycenia: 8,4 µmol CO₂/m²/s przy PAR równym 1080 µmol/m²/s.

Ćwiczenie 2.

Wykazanie zużycia CO₂ w procesie fotosyntezy.

Przygotowano 150 ml przegotowanej wody a następnie dodano do niej kilka kropel błękitu bromotymolowego. Odlano niewielką ilość zabarwionej wody do probówki C a pozostałą resztę przedmuchiwano aż do zmiany koloru roztworu na żółto-zielony. Taki roztwór następnie rozlano do probówki A i B. W każdej probówce umieścić kilka nitek mchu jawajskiego. Probówkę A owinięto folią aluminiową i umieszczono w zaciemnionym miejscu natomiast B i C naświetlano. Po 1 h obserwowano zmiany.

Probówka	Barwa początkowa	Warunki świetlne	Barwa końcowa
A	żółta	ciemno	żółta
B	żółta	jasno	jasnoniebieska
C	niebieska	jasno	niebieska

Wnioski:

Doświadczenie polegało na obserwacji pochłaniania dwutlenku węgla w procesie fotosyntezy. W tym celu użyto błękit bromotymolowy który posłużył jako wskaźnik zmiany pH. Błękit ten w zasadowym odczynie przyjmuje zabarwienie niebieskie natomiast w kwaśnym żółty. Wprowadzenie CO₂ do probówki skutkuję zakwaszeniem wody usunięcie zaś prowadzi do podniesienia pH.

W probówce A, która znajdowała się w ciemności i wcześniej została przedmuchana, nie doszło do zmiany koloru na niebieski ponieważ w ciemności nie doszło do procesu fotosyntezy tylko do procesu oddychania czyli w dalszym ciągu do roztworu dostarczany był CO₂.

W probówce B doszło do zmiany koloru ponieważ była ona naświetlana więc doszło do procesu fotosyntezy czyli pobierania z otoczenia CO₂.

Natomiast w C która nie była przedmuchana więc zachowała kolor niebieski także po naświetlaniu doszło do procesu fotosyntezy więc do pobierania CO₂ z otoczenia.

Ćwiczenie 3.

Reakcja Hilla na izolowanych chloroplastach.

Sporządzono 0,34 M roztwór sacharozy. Odważono ok 10 g. liści szpinaku i usunięto grubsze żyłki. Następnie pocięto liście i zalano 100ml 0,34 M sacharozy i homogenizowano przez 30 min. Odlano do 2 probówek. Nr. 1 dodano 2/3 objętości homogenizowanych liści i ok. 1 ml indofenolu wymieszano, zawinięto folią aluminiową i odstawiono w zaciemnione miejsce. Nr.2 dodano 2/3 objętości homogenizowanych liści i ok. 1 ml indofenolu wymieszano, naświetlano kilka minut. Obserwowano wyniki.

Wyniki:

Warunki	Barwa początkowa	Barwa końcowa
Ciemność	granatowo-zielona	granatowo-niebieski
Światło	granatowo-zielona	zielony

Wnioski:

Dodawany indofenol jest sztucznym akceptorem elektronów który ulega redukcji. Widząc odbarwienie obserwujemy transport elektronów (zachodzi proces fotosyntezy), czyli w probówce 2. Po naświetleniu probówki która znajdowała się w ciemności także dochodzi do odbarwienia.

Ćwiczenie 4.

Próba Sachsa.

Zasłonięto liście trzykrotki szczelnie do połowy folią aluminiową (maska została założona od strony wierzchołka), które następnie silnie naświetlano przez okres 2-3 dni. Po tym okresie liście zagotowano w łaźni wodnej w zlewce z woda a potem w etanolu. Odbarwiony liść przeniesiono do szalki Pertiego i zalano płynem Lugola. Obserwowano wyniki.

Wyniki:

Liść od strony gdzie znajdowała się maska był jaśniejszy. Zabarwiła się strona od „ogonka”.

Wnioski:

Strona gdzie nie znajdowała się maska zabarwiła się ponieważ płyn Lugola służy do wykrywania skrobi. Skrobia jest to węglowodan, polisacharyd roślinny, składający się wyłącznie z merów glukozy połączonych wiązaniami α-glikozydowymi, pełniący w roślinach rolę magazynu energii. Natomiast glukoza jest jednym z produktów fotosyntezy.