Zastosowanie FISH

(Fluorescencyjna Hybrydyzacja in situ):

1. precyzyjna lokalizacja punktów złamań w chromosomach

2. badanie fuzji genowych (np. białaczki)

3. określanie pochodzenia chromosomów markerowych

4. badanie mikrodelecji

5. określanie pochodzenia centromerów

6. badanie obecności telomerów

7. badanie amplifikacji genów

8. mozaicyzm

9. kariotypowanie

10. …

Sonda: dwuniciowy odcinek DNA lub cDNA, komplementarny do badanego obszaru, wyznakowany pośrednio lub bezpośrednio

Schemat postępowania przy Bad. FISH

1. Przemycie preparatu 2xSSC (2 min);

2. szereg alkoholowy: 70%, 90%, 100% EtOH (po 2 min);

3. nałożenie sondy;

4. denaturacja (np. 73*C, 2 min);

5. hybrydyzacja 37*C, noc;

6. odpłukanie tła (np. 73*C, 0,4xSSC, 2 min)

7. nałożenie DAPI

8. analiza obrazu

FISH - SONDY:

• malujące - metafazy

translokacje, aneuploidia, chromosomy

markerowe

• centromerowe - jądra interfazalne, metafazy

dicentryki, aneuploidia: Zespół Downa,

Edwardsa, Patau, Turnera, Klinefeltera.

• specyficzne - jądra interfazalne, metafazy

telomery, specyficzne translokacje (BCR/abl)

mikrodelecje (np.Zespół Williamsa, PWS)

nuc ish 21q22(D21S23x3)[100]

ish t(2;14)(wcp2+;wcp2+)

ish 4p16.3(D4S3327-D4S166x2),4qter(dj963k6x2)

ish 18cen(D18Z1x2)[100]

ish der(4)t(4;22)(WHSCR-,dj96k6+,D22S1726+;D22S1726+)

ish 22q11.2(TUPLE1x2),22qter(N85A3x2)[100]

ish Xcen(DXZ1x1),Ycen(DYZ3x1)[56]

nuc ish Xcen(DXZ1x1),Ycen(DYZ3-)[15]/Xcen(DXZ1x2),Ycen(DYZ3-)[400]

ish t(4;20)(wcp4+;wcp4+)

ish t(2;D)(wcp2+;wcp2+)

nuc ish 9q34(ABLx2),22q11.2(BCRx2)(ABLconBCRx1)[80]

Rodzaje sond

Sonda

telomerowa

Sonda

specyficzna

Sonda

centromerowa

Sonda malująca