Ćwiczenia 8

Właściwości kwasów nukleinowych

1. Reakcja charakterystyczna rybozy i deoksyrybozy

WYNIKI:

2. Rozdzielanie mieszaniny DNA i RNA

Mieszanina DNA + RNA

DNA + rybonukleotydy

DNA + rybonukleotydy

DNA (osad) + rybonukleotydy (supernatant)

osad supernatant

	Hydrolizat DNA	RNA	DNA + RNA
odczynnik Biala	-		osad:
						supernatant:
			odczynnik Dischego		-	osad:
						supernatant:	- - -

1

RNA (H₂O)

1

2

3

4

DNA (HClO₄)

+ odczynnik Dischego

(difenyloamina + CH₃COOH)

10 min. / 100°C

+ odczynnik Biala

(orcynol + HCl)

20 min. / 100°C

1

2

3

4

NIEBIESKI

-

-

ZIELONY

hydroliza zasadowa (30 min./37°C)

schładzanie

jedynie RNA podlega hydrolizie zasadowej

DNA jako związek wielkocząsteczkowy jest wypierany z roztworu przez kwas i wytrąca się w osadzie

schłodzony TCA

HClO₄

hydroliza kwaśna 20 min /70°C

schładzanie

+ odczynnik Dischego

+ odczynnik Biala

+ odczynnik Dischego

Nukleotydy nie rozpadają się! Odczynnik Dischego zawiera kwas octowy, który jest słabym kwasem.

Nie ma wolnej deoksyrybozy (związanej zresztą też)

= brak reakcji barwnej

WYNIK:

-

Odczynnik Dischego z wolną deoksyrybozą, która powstała w kwaśnej hydrolizie DNA daje reakcję barwną.

WYNIK:

NIEBIESKI

Nukleotydy po wpływem silnych kwasów obecnych w odczynniku Biala hydrolizują do wolnych cukrów, zasad i ortofosforanu. Zachodzi reakcja barwna z wolną rybozą.

WYNIK:

ZIELONY

ZIELONY

ZIELONY

NIEBIESKI

NIEBIESKI

---