Określanie aktywności amylolitycznej soku trzustkowego metodą Wohlgemutha
Sposób wykonania:
Do 10 probówek dodajemy 1 ml 0,9% NaCl. Następnie do 1. probówki należy dodać 1 ml soku trzustkowego. Z otrzymanej mieszaniny pobieramy 1 ml i dodajemy do 2. probówki. Później z 2. pobieramy 1ml i dodajemy do 3. itd. Z ostatniej probówki należy pobrać 1ml i wylać. Wykonuje się w ten sposób szereg rozcieńczeń. Następnie do każdej probówki należy dodać 0,2 ml 1% roztworu skrobii. Później inkubujemy probówki w temp. 38oC przez 30 min.
Po ochłodzeniu probówek do każdej należy dodać po kropli roztworu jodu w jodku potasu.
Obserwacje:
W probówkach 1-3 nie zaszła żadna zmiana. W probówkach 4-10 wytrącił się granatowy osad.
Obliczenia:
Do obliczenia aktywności amylolitycznej soku trzustkowego wykorzystujemy ostatnią probówkę, w której nie wytrącił się osad czyli nr 3.
Najpierw obliczamy stopień rozpuszczenia soku w NaCl. W 1. probówce jest 2-krotny (1ml NaCl - 1ml soku), w 2. probówce 4-krotny natomiast w 3. 8-krotny.
Później obliczamy ile skrobii dodaliśmy do każdej z probówek.
1g - 100ml
1000mg - 100ml
x - 0,2ml
x =2mg
Na koniec mnożymy stopień rozpuszczenia przez ilość skrobii:
2x8=16 jednostek amylazy
Wnioski:
W pierwszych trzech probówkach znajdowała się wystarczająca ilość amylazy aby mogła ona rozłożyć skrobię. W pozostałych było jej za mało dlatego cała skrobia nie została rozłożona i pod wpływem roztworu jodu w jodku potasu wybarwiła się na granatowo.
Im wyższy wynik jednostek amylazy tym lepsza aktywność.
Trawienie skrobi przez amylazę trzustkową
Wykonanie:
I probówka:
0,5 ml 1% roztworu skrobi
+ 2 ml NaCl
+ 1 kropla płynu Lugola
+ 1 ml soku trzustkowego ze świeżej trzustki
Obserwacje:
Roztwór po dodaniu płynu Lugola zabarwił się na granatowo.
Po dodaniu soku trzustkowego nastąpiło natychmiastowe odbarwienie roztworu za sprawą rozłożenia skrobi
Wnioski:
Amylaza trzustkowa wykazuje dużą aktywność w obecności jonów chlorkowych.
II probówka:
0,5 ml 1% roztworu skrobi
+ 2 ml wody
+ 1 kropla płynu Lugola
+ 1 ml soku trzustkowego ze świeżej trzustki
Obserwacje:
Roztwór po dodaniu płynu Lugola uzyskał lekkie niebieskie zabarwienie.
Po dodaniu soku trzustkowego nastąpiło odbarwienie roztworu, przebiegające jednak w wolniejszym tempie niż poprzednio.
Wniosek:
Rozcieńczenie roztworu i brak obecności jonów chlorkowych obniżają aktywność amylazy trzustkowej.
III probówka:
0,5 ml 1% roztworu skrobi
+ 2 ml NaCl
+ 1 kropla płynu Lugola
+ 1 ml soku trzustkowego z przegotowanej trzustki
Obserwacje:
Roztwór po dodaniu płynu Lugola uzyskał granatowe zabarwienie.
Po dodaniu przegotowanej trzustki nie nastąpiło odbarwienie roztworu.
Wnioski:
Przegotowanie trzustki spowodowało zahamowanie aktywności amylazy trzustkowej.