elektroforeza, Studia, Inżynieria genetyczna


Temat: Elektroforeza DNA w żelu agarozowym

Zagadnienia:

Rozdział elektroforetyczny kwasów nukleinowych umożliwia:

Procedura

  1. Do szklanej kolby stożkowej albo okrągłodennej (250-500 ml) odważyć ilość agarozy stosowaną do potrzebnego stężenia i objętości tacki do wylewania żelu. Należy odważyć 1g agarozy do przygotowania 100 ml 1 % żelu.

  2. Wlać do kolbki wymaganą objętość buforu do elektroforezy (1xTBE).

  3. Zamieszać silnie zawartość kolbki i rozpuścić agarozę przez zagotowanie. Najwygodniej jest użyć do tego celu kuchenki mikrofalowej, ale żel można również ogrzewać przy pomocy zwykłego palnika laboratoryjnego lub płaszcza grzejnego. Jeśli agaroza nie jest całkowicie rozpuszczona należy powtórzyć gotowanie.

UWAGA!

Upłynniony i rozgrzany żel agarozowy silnie kipi - oparzenia mogą być bardzo dotkliwe.

d) Schłodzić żel w temperaturze pokojowej do temperatury około 60oC.

e) Do schłodzonego żelu dodać roztworu bromku etydyny do stężenia 0,1 μg/ml i silnie

zamieszać.

UWAGA!

Bromek etydyny jest silnym kancerogenem. Unikać kontaktu ze skórą, przy pracy z

bromkiem etydyny używać rękawic gumowych.

  1. Wylać żel na wcześniej przygotowaną i umieszczoną w lodówce tackę. Niezwłocznie umieścić grzebień w żelu. W żelu nie powinno być żadnych pęcherzyków powietrza.

  2. Po zastygnięciu żelu (około 20 minut) ostrożnie wyjąć grzebień, umieścić tackę z żelem w naczyniu do elektroforezy i zalać żel buforem (1xTBE), tak aby żel był 2-3 mm pod powierzchnią buforu.

  3. Próbki i wzorce masowe DNA zmieszać z odpowiednią ilością buforu obciążającego z barwnikiem i nanieść na żel.

  4. Rozwijać elektroforezę do uzyskania odpowiedniego rozdziału przy napięciu 90V.

  5. Obejrzeć żel na transiluminatorze UV, w przypadku niedostatecznego rozdziału można kontynuować elektroforezę. Wykonać dokumentację żelu. Narysować w zeszycie żel, układ prążków i wypisać wnioski.

1



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
enzymy restrykcyjne-stud, Studia, Inżynieria genetyczna
Obliczenia cw 2, studia, materiały od roku wyżej, Inżynieria genetyczna, inżynieria
Zadania EiE, SiMR, Studia inżynierskie, Semestr III 3, Elektronika i Elektrotechnika 2
Inżynieria genetyczna roślin, ♥ Studia, ⇒ Biologia, ♦ Genetyka, ♦ Wykłady, &
inzynieria, studia, materiały od roku wyżej, Inżynieria genetyczna, inżynieria
metody msp, Studia, I semestr III rok, Inżynieria genetyczna
INZYNIERIA GENETYCZNA - wykłady, Studia UMCS, V semestr, Inżynieria genetyczna
Egzamin inzynieria gen, Studia Biotechnologia, Semestr 5, Inżynieria genetyczna
IG.2 - Ocena stopnia degradacji kwasów nukleinowych poprzez rozdział elektroforetyczny, Genetyka, In
1 kolokwium inżynieria laborki, Studia Biotechnologia, Semestr 5, Inżynieria genetyczna
inżynieria genetyczna, studia, bio, 4rok, 8sem, inzynieria genetyczna, lab
pytania inzynieria, Studia UMCS, V semestr, Inżynieria genetyczna
Obliczenia cw 2, studia, materiały od roku wyżej, Inżynieria genetyczna, inżynieria
inżynieria genetyczna
Genetyk 21 pytań, Studia - pielęgniarstwo, GENETYKA I PARAZYTOLOGIA, GENETYKA I PARAZYTOLOGIA
MIERNIK ELEKTRODYNAMICZNY, Studia, Metrologia
Elektrowrzeciono, Studia, Studia sem III, Uczelnia

więcej podobnych podstron