Metody barwienia i morfologia komrki bakteryjnej, Mikrobiologia


Techniki przygotowania i barwienia preparatów mikroskopowych.
Techniki mikroskopowania.
Struktury anatomiczne istotne w identyfikacji i diagnostyce drobnoustrojów.
Ocena morfologii drobnoustrojów.


TECHNIKA BARWIENIA

Bakterie prawie nie załamują światła, w związku z tym, aby je uwidocznić, należy użyć barwnych związków chemicznych. Barwienie jest procesem drastycznym, w trakcie którego następuje śmierć komórki. W większości metod, komórki barwią się jednolicie.
Stosowane barwniki możemy podzielić na:

  1. Kwaśne - eozyna, fuksyna kwaśna

  2. Zasadowe - błękit metylenowy, fuksyna zasadowa, czerwień obojętna, fiolet krystaliczny.

Barwienie ma na celu:
a) umożliwić obejrzenie układu przestrzennego morfologii i anatomii komórek
b) wykazać obecność bakterii w badanym preparacie

Przygotowanie preparatu z hodowli:
1.  Przygotowanie rozmazu na szkiełku podstawowym - pobrać jedną kolonię ezą i rozetrzeć na szkiełku.
2. Połączyć z kroplą 0,9% NaCl
3. Pozostawić do wyschnięcia
4. Utrwalić w płomieniu palnika

Metody barwienia:

Ocena morfologii komórki:

a) wynik barwienia

b) wielkość

c) układ
d) kształt komórki bakteryjnej

e) obecność i ułożenie rzęsek

f) obecność otoczki
g) obecność ciał zapasowych
h) obecność, kształt, wielkość, ułożenie przetrwalników

Typ barwienia

Metoda

Metodyka

Wynik

Proste - pozytywne

Metoda Löfflera

Błękit metylenowy - 5 min

Spłukać wodą

Jednolite niebieskie, (wyjątek Corynebacterium - zabarwione nierównomiernie)

Proste - pozytywne

Barwienie safraniną

Safranina - 5 minut

Jednolite czerwone zabarwienie

Proste - negatywne

Barwienie nigrozyną lub tuszem chińskim

Na brzegu szkiełka podstawowego zmieszać kolonię bakteryjną z kroplą barwnika, drugim szkiełkiem wykonać rozmaz

Tło ciemne, niezabarwione drobnoustroje (otoczki)

Złożone pozytywno - negatywne

Barwienie otoczek wg Burri - Ginsa

Nigrozyna + fuksyna fenolowa Ziehla

Na brzegu szkiełka podstawowego zmieszać kolonię bakteryjną z kroplą nigarozyny, drugim szkiełkiem wykonać rozmaz. Dobarwić fuksyną fenolową - 1-2 min

Ciemne tło, jasne otoczki, czerwone komórki bakteryjne

Złożone pozytywno - negatywne

Barwienie przetrwalników wg Dornera

Na brzegu szkiełka podstawowego zmieszać kolonię bakteryjną z kroplą nigarozyny, drugim szkiełkiem wykonać rozmaz. Dobarwić safraniną na gorąco.

Ciemne tło, czerwone przetrwalniki

Złożone - pozytywne

Metoda Grama

Fiolet krystaliczny - 2-3 min

Spłukać wodą

Płyn Lugola - 1-2 min

Spłukać wodą

Odbarwiacz

Spłukać wodą

Fuksyna zasadowa - 0,5 min

Spłukać wodą

Gram dodatnie - fioletowe

Gram ujemne - czerwone

 

Gram chwiejne - czerwono- fioletowe (np. Corynebacterium)

Złożone - pozytywne

Metoda Neissera

Wybarwianie ziaren metachromatycznych (Babesa-Ernst'a) u Corynebacterium

Neisser I (roztwór błękitu metylenowego)

Neisser II (roztwór fioletu krystalicznego).

Zmieszać odczynniki w stosunku 2:1, barwić 10 min. Chryzoidyna 10 - 15 s

Komórki bakterii - żółto - zielone, ziarna metachromatyczne - granatowe. 

Złożone - pozytywne

Metoda Waysona

Do barwienia preparatów bezpośrednich

Barwnik Waysona - 2 min (fiolet krystaliczny + błękit metylenowy)

Komórki bakterii ciemnogranatowe, inne np. nabłonki, leukocyty jasnofioletowo - granatowe

Złożone - pozytywne

Metoda Wirtza-Conklina do barwienia przetrwalników

Safranina - 5 min

Spłukać wodą

Zieleń malachitowa na gorąco

Spłukać wodą

Komórki bakterii czerwone,

Przetrwalniki zielone

Złożone - pozytywne

Metody barwienia bakterii kwasoopornych:

Ziehl - Neelsena

Fuksyna karbolowa na gorąco

Spłukać wodą

Spłukać kwaśnym alkoholem

Bakterie kwasooporne - czerwone

Tło i pozostałe bakterie - niebieskie

Złożone - pozytywne

Metody barwienia bakterii kwasoopornych

Kinyoun - Gabett'a

Błękit metylenowy 20 min

Efekt barwienia j.w.

Złożone - pozytywne

Metody barwienia bakterii kwasoopornych:

Kinyoun

Barwnik Kinyoun - 3 min

Barwnik Gabett'a

Spłukać wodą

Fuksyna karbolowa - 5 min

Spłukać wodą

Kwaśny alkohol- 3 min

Spłukać wodą

Zieleń brylantowa 4 min

Spłukać wodą

Bakterie kwasooporne czerwone

Tło i pozostałe bakterie - zielone

BUDOWA KOMÓRKI BAKTERYJNEJ



  1. struktury podstawowe
    · ściana komórkowa
    · błona cytoplazmatyczna
    · cytoplazma
    · rybosomy
    · nukleoid

  2. struktury dodatkowe
    · otoczki
    · rzęski
    · fimbrie
    · przetrwalniki
    · wtręty komórkowe
    · plazmidy


ŚCIANA KOMÓRKOWA

Zbudowana jest z peptydoglikanu (mureiny). Cząsteczka peptydoglikanu jest zbudowana z długich łańcuchów polisacharydowych, które łączą się w sieć za pomocą mostków peptydowych.

Każdy łańcuch polisacharydowy zbudowany jest z dwuckrów:

→ N-acetyloglukozaminy

→ Kwasu N-acetylomuraminowego (występuje wyłącznie u organizmów prokariotycznych).

Do kwasu N-acetylomuraminowego dołączony jest tetrapeptyd Często w jego składzie spotyka się aminokwasy występujące jedynie u bakterii ( np. kwas mezodwu-aminopimelinowy, izomery D alaniny i kwasu gluta-minowego).

Wiązania krzyżowe peptydoglikanu powstają przez połączenie tetrapeptydów sąsiadujących łańcuchów mostkiem peptydowym

Wiązanie powstaje pomiędzy przedostatnią resztą jednego tetrapeptydu (przeważnie L-lizyna lub kwas mezodwuaminopimelinowy) a ostatnią resztą drugiego tetrapeptydu (zwykle D-alanina)

Mostki zbudowane są przeważnie z glicyny lub L -alaniny.


Ze względu na różnice w budowie ściany komórkowej dzielimy bakterie na
Gram - dodatnie i Gram - ujemne.

Ściana komórkowa bakterii Gram - dodatnich

Ściana komórkowa bakterii Gram - ujemnych

3. białka

4. peptydoglikan

BŁONA CYTOPLAZMATYCZNA

NUKLEOID

CYTOPLAZMA

RYBOSOMY

ZMIENNE ELEMENTY KOMÓRKI BAKTERYJNEJ

OTOCZKI

RZĘSKI

FIMBRIE / PILE

PRZETRWALNIKI (ENDOSPORY)

5



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Metody barwienia i morfologia komorki bakteryjnej, Nieuporządkowane, Materiały tekstowe
Metody barwienia i morfologia komorki bakteryjnej, Nieuporządkowane, Materiały tekstowe
Metody barwienia i morfologia drobnoustrojów
MIKROBIOLOGIA laboratorium 2 Morfologia komorki bakteryjnej. Barwienie zlozone, Studia, OŚ, Mikrobio
Morfologia drobnoustrojów - Metody Barwienia, Kosmetologia, Mikrobiologia i Immunologia
Morfologia bakterii-barwienie, UM Wrocław - Stomatologia, Mikrobiologia i mikrobiologia jamy ustnej
MIKROBIOLOGIA laboratorium 1 Morfologia komorki i kolonii bakteryjnej. Barwienie proste, Studia, OŚ,
Cw 2 Morfologia komórki bakteryjnej Barwienie złożone
metody barwienia, Mikrobiologia
Cw 2, Morfologia komórki bakteryjnej Barwienie złożone
Budowa komorki bakteryjnej, metody barwienia
Morfologia bakterii, Mikrobiologia
Metabolizm bakterii1, Mikrobiologia

więcej podobnych podstron