metody oznaczania lekowrazliwości, Metody oznaczania lekowrażliwości izolowanych drobnoustrojów


Metody oznaczania lekowrażliwości izolowanych drobnoustrojów

Metoda dyfuzyjno-krążkowa wykonywana w Polsce zgodnie z zaleceniami National Committee for Clinical Laboratory Standards - NCCLS

Podłoże badanie wykonywane jest na podłożu agarowym Mueller-Hintona (M-H) wzbogaconym w zależności od przeznaczenia np. krwią (paciorkowce) lub Isovitalexem (Haemophilus spp.); podłoże powinno być wystandaryzowane (odpowiedni skład, pH, grubość)

Inokulum hodowla w logarytmicznej fazie wzrostu lub zawiesina w soli fizjologicznej o gęstości 0,5 w skali McFarlanda (dla niektórych gatunków bakterii wyższa); zawiesinę należy równomiernie rozprowadzić na powierzchni podłoża

Krążki krążki bibułowe nasycone określonym stężeniem antybiotyku; dobór krążków

jest oparty na zaleceniach Krajowego Konsultanta w zakresie Mikrobiologii Klinicznej*

Inkubacja temperatura: 350C; czas: 18 godzin

Odczyt pomiar średnicy stref zahamowania wzrostu badanego szczepu wokół krążków nasyconych antybiotykami lub chemioterapeutykami

Interpretacja na podstawie wielkości stref zahamowania wzrostu (uwaga! niekiedy,

w zależności od firm produkujących krążki, interpretacja wielkości stref dla tych samych antybiotyków jest różna)

(*) Zestaw polecanych krążków z antybiotykami umożliwia:

Metody umożliwiające określenie MIC (minimal inhibitory concentration)

E-testy bibułowe paski nasycone antybiotykami w gradiencie stężeń z podziałką umożliwiającą odczyt wartości MIC (wartość najbliższa miejscu, w którym

nie ma już strefy zahamowania wzrostu); podłoże, inokulum, warunki inkubacji - takie jak w metodzie dyfuzyjno-krążkowej

metoda rozcieńczeniowa na podłoża (płynne lub stałe) zawierające kolejne rozcieńczenia antybiotyku posiewane są badane szczepy; po 18 godzinnej inkubacji wartości MIC odczytywane są na podstawie obserwowanego zahamowania wzrostu

Metody półautomatyczne lub automatyczne

Panele zawierające graniczne rozcieńczenia antybiotyków - odczytywane w systemie ATB lub Sceptor

Wykrywanie mechanizmów oporności bakterii na antybiotyki

Cel: określenie epidemiologii szerzenia się mechanizmów oporności w szpitalu

Wykrywanie klasycznych -laktamaz:

test cefinazowy - z użyciem chromogennej cefalosporyny (nitrocefina) wrażliwej na -laktamazy zarówno bakterii Gram-dodatnich jak i Gram-ujemnych - cefalosporyna ta ulegając hydrolizie zmienia barwę z żółtej na różową

metoda jodometryczna - do wykrywania penicylinaz (obecnie rzadko stosowana)

Wykrywanie -laktamaz typu ESBL

Zasada testów oparta jest na synergistycznym działaniu antybiotyków oksyimino-beta-laktamowych (cefotaksym, ceftazydym, aztreonam) i inhibitorów beta-laktamowych (kwas klawulanowy, sulbaktam, tazobaktam); testy wykonywane są na podłożu Mueller-Hintona z zastosowaniem inokulum o gęstości 0,5 w skali McFarlanda

Test dwóch krążków (double disk synergy test - DDT) według metody Jarliera i wsp.

w odległości 20 mm od siebie należy umieścić krążek nasycony inhibitorem -laktamaz (amoksycylina z kwasem klawulanowym) i ceftazydymem, cefotaksymem lub aztreonamem;

interpretacja: pojawienie się dodatkowej, "dyskowatej" strefy zahamowania wzrostu między krążkami lub powiększenie strefy wokół krążka nasyconego antybiotykiem oksyimino--laktamowym od strony krążka z inhibitorem jest dowodem ekspresji ESBL.

E-test - pasek nasączony gradientem stężeń - z jednej strony ceftazydymu (TZ), z drugiej ceftazydymu z kwasem klawulanowym (TZL);

interpretacja: szczep wytwarza ESBL jeżeli iloraz wartości MIC dla TZ i MIC dla TZL jest wyższy od czterech (np. MIC dla TZ = 32; MIC dla TZL = 4;

iloraz = 8; wniosek: szczep ESBL-dodatni)

Metody automatyczne

ATB BLSE - w metodzie zastosowano: aztreonam ( stężenia: 0,5 - 8 mg/l)

aztreonam + sulbaktam ( stężenia: 0,06 - 1 mg/l)

ceftazydym ( stężenia: 0,5 - 32 mg/l)

ceftazydym + sulbaktam ( stężenia: 0,6 - 4 mg/l)

interpretacja: 4 - krotne zmniejszenie wartości MIC w obecności inhibitora jest dowodem ekspresji ESBL

Wykrywanie indukcyjnej -laktamazy

Test wykonywany jest na podłożu Mueller-Hintona z zastosowaniem inokulum o gęstości 0,5 w skali McFarlanda

Test dwóch krążków

w odległości 30 mm od siebie należy umieścić krążek nasycony silnym induktorem (imipenem, cefoksytyna) i krążek zawierający antybiotyk łatwo hydrolizowany przez

-laktamazy indukcyjne (ceftazydym);

interpretacja: "ugięcie" strefy zahamowania wzrostu wokół ceftazydymu od strony krążka z induktorem świadczy o zdolności szczepu do syntezy indukcyjnych -laktamaz

Wykrywanie metycylinooporności

Metoda dyfuzyjna - z zastosowaniem krążków zawierających metycylinę (5 g/ml) lub oksacylinę (g/ml); test wykonywany jest na standardowym podłożu M-H z inkubacją w temp. 300 C przez 24 godziny lub na podłożu M-H z 4,5% Na Cl w temp. 350 C przez 24 godziny

Metoda przesiewowa - posiew badanego szczepu na podłoże M-H zawierające metycylinę (25 mg/l) lub oksacylinę (6 mg/l)

testy komercyjne

ATB-OXA panel z oksacyliną; szczep zawieszany jest w specjalnym podłożu

ATB Na Medium zawierającym 5% NaCl

Cristal MRSA ID - panel z oksacyliną

Metody molekularne - wykrycie genu mec A z zastosowaniem techniki PCR

Wykrywanie opornych szczepów Enterococcus spp.

metoda dyfuzyjno-krążkowa z użyciem krążków zawierających wysokie stężenia gentamycyny (120 g) i streptomycyny (300 g)

metoda przesiewowa agar z wyciągiem sercowo-mózgowym (BHI) z dodatkiem gentamycyny (500 mg/l) lub streptomycyny (2 000 mg/l)

metoda dyfuzyjno-krążkowa z użyciem krążków zawierających wankomycynę

metoda przesiewowa podłoże BHI z dodatkiem wankomycyny (6 mg/l)

W każdym przypadku określania lekowrażliwości i mechanizmów oporności należy wykonywać kontrole stosowanych testów przy użyciu szczepów referencyjnych.

Oznaczenie poziomu antybiotyku w płynach ustrojowych

Powinno być określone w przypadku:

mikrobiologia

metody oznaczania lekowrazliwosci

strona 3



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Metody oznaczania ogólnej liczebności drobnoustrojów
Metody oznaczania ogólnej liczebności drobnoustrojów
12 11 maja 2011 Metody oznaczania ogólnej liczebności drobnoustrojów
12 Oznaczanie ogólnej liczby drobnoustrojówid 13287
metody oznaczania lekowrazliwosci
Metody ilościowego oznaczania drobnoustrojów, Studia - materiały, semestr 4, Mikrobiologia żywności
Metody wykrywania i identyfikacji oraz oceny lekowrazliwści drobnoustrojów
pwsz kalisz Metody oznaczania mikroorganizmów w powietrzu, inżynieria ochrony środowiska kalisz, a p
metodyka oznaczania parametrów hydrogeologicznych skał 7AEVHXD5KRVR3RLFDAXYW2FTBYJAVOCNH77UQDA
Metody oznaczania oraz identyfikacji związków przeciwutleniających
Metodyka oznaczanie zawartosci azotanow
Białka i metody ich oznaczania w mleku
metody oznaczania białek

więcej podobnych podstron