Sprawozdanie- elektroforeza, biochemia

Doświadczenie rozpoczynamy od sporządzenia żelu agarozowego, który wylejemy na płytkę średniej wielkości. Wspomniany żel stanowi swoiste sito molekularne, w którym za pomocą przyłożonego napięcia następuje rozdział cząsteczek DNA ze względu na ich masę. Odważoną agarozę rozpuszczamy w buforze, którym jest TBE czyli Tris - boran - EDTA o pH = 8. Następnie tak przygotowany roztwór ogrzewamy do momentu, w którym cała agaroza rozpuści się. Kolejno roztwór ochładzamy do temperatury ok. 60⁰C i dodajemy bromku etydyny, który jest swoistym interkalatorem dla podwójnych nici DNA. Za pomocą tego związku można uwidocznić DNA po lub w trakcie elektroforezy. Tak przygotowany żel wylewamy na płytkę i pozostawiamy w temperaturze pokojowej na około 30 - 45 min. aby spolimeryzował. Dodatkowo wsadzamy grzebień, który ma za zadanie uformować kieszonki do których nanoszone będą badane próby. W międzyczasie zajmujemy się przygotowaniem preparatów DNA. Materiał genetyczny, który będzie poddawany elektroforezie należy zagęścić w kieszonkach używając glicerolu a także błękitu bromofenolowego. Po spolimeryzowaniu żelu płytkę umieszczamy w aparacie do elektroforezy i zalewamy buforem TBE tak aby przekraczał grubość żelu. Naniesione na żel badane próby podłączamy do źródła prądu i prowadzimy ją do momentu, gdy barwnik osiągnie wymagane położenie. Elektroforezy nie należy prowadzić zbyt długo gdyż bromek etydyny podczas rozdziału wędruje w kierunku przeciwnym do badanej próby. Po skończonej elektroforezie nasz żel z rozdzielonymi na nim cząsteczkami DNA poddajemy działaniu promieniowania UV w celu wizualizacji przeprowadzonego rozdziału.