1

KINETYKA REAKCJI ENZYMATYCZNYCH Wyznaczanie stałej Michaelisa (K_M) na przykładzie kwaśnej fosfatazy (EC 3.1.3.2)

WSTĘP

Kinetyka enzymatyczna stanowi dział enzymologii zajmujący się badaniem szybkości reakcji enzymatycznych (gr. kinezis - ruch) oraz wpływu na nią różnych czynników. Podstawą kinetyki enzymatycznej jest analiza aktywności enzymu, której miarę stanowi szybkość katalizowanej przez enzym reakcji. Wyraża się ją przyrostem ilości produktów lub spadkiem stężenia substratu w jednostce czasu. Na przebieg reakcji enzymatycznej wpływa wiele czynników chemicznych i fizycznych, takich jak budowa i stężenie enzymu, stężenie substratu, temperatura, pH, stężenie aktywatorów i inhibitorów.

W celu poznania ogólnego mechanizmu działania enzymu, szczególnie istotne jest badanie wpływu stężenia substratu na szybkość reakcji enzymatycznej.

Rys. 1. Zależność szybkości reakcji enzymatycznej od stężenia substratu (przy stałym stężeniu enzymu).

Dla wielu enzymów zależność szybkości reakcji (v) od stężenia substratu (S) może być wyrażona prostą zależnością matematyczną, której obrazem graficznym jest hiperbola (Rys. 1).

Dane kinetyczne przedstawione na powyższym rysunku opisuje równanie MichaelisaMenten V_max [S]

_v = -

K_m + [S]

1